[发明专利]同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法

权利要求书

1.一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

对血清样品进行分析前，先对样品进行预处理，步骤如下：向血清样品中加入等体积乙腈，待蛋白沉淀后加入超纯水稀释；在4℃条件下，以10000rpm高速离心，收集上清液转移至进样瓶中待测；

利用Online SPE-HPLC-ICP-MS对上清液进行分析，其中：

在线固相萃取条件：设定左泵为上样富集泵，右泵为分析泵，所述上清液在3.0mL/min，100％水相的条件下，通过进样系统上样到25μm*4.6mm*20mm的在线固相萃取柱，采用体积比为甲醇：乙腈：水＝54:26:20混合溶剂进行洗脱，洗脱时间为5min，洗脱流速为1.0mL/min；

色谱条件：选用规格为4.6×250mm，5μm的C18色谱柱；

电感耦合等离子体质谱条件包括：射频功率1500W，采样深度8mm，载气为氩气，载气流速1.5mL·min^-1、可选气体为体积比为80:20的Ar和O₂，检测元素为⁷⁹Br，⁸¹Br。

2.根据权利要求1所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，所述预处理步骤具体为：取血清样品200μL和等体积的乙腈对样品中的蛋白进行沉淀，加入超纯水将样品稀释至1.0mL后进行高速离心，将上清液取出进行仪器分析。

3.根据权利要求1或2所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，在固相萃取柱重复进样10次后，柱压仍保持稳定，表明样品预处理满足系统要求。

4.根据权利要求1或2所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，固相萃取柱对于多溴二苯醚及其羟基代谢产物的回收率均高于60％，且回收率的相对标准偏差均小于15％。

5.根据权利要求1或2所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，定量限为0.14-0.74ng/L，基质加标回收率在61％-77％之间。

6.根据权利要求1或2所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，相对标准偏差为3.64％-10.12％。

7.根据权利要求1或2所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，所检出的PBDEs共有4种单体BDE-28，BDE-47，BDE-99和BDE-153被检出，检出率为7％-20％，BDE-28检出率最高。

8.根据权利要求6所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，检出单体的浓度范围为0.1-1.4ng/mL，平均浓度最高的单体是BDE-47。

9.根据权利要求1或2所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，至少两种OH-PBDEs被检出，包括5-OH-BDE-47和6-OH-BDE-47，检出率分别为7％和10％，浓度范围为0.02-0.07ng/mL。

10.根据权利要求1-9之一所述的一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，其特征在于，在线固相萃取柱选择为Oasis HLB型，液相色谱柱选择为ZORBAX Eclipse Plus C18。