[发明专利]同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法

说明书

本发明提供一种同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，建立了在线固相萃取‑高效液相色谱电感耦合等离子体质谱法同时测定血清中6种多溴二苯醚和5种羟基代谢产物。200μL血清样品经蛋白沉淀、稀释后可直接上机分析。样品中目标物自动化富集在固相萃取柱，目标物采用甲醇/乙腈/水混合溶剂反向洗脱至液相色谱电感耦合等离子体质谱质谱仪完成分离分析。本方法成功地应用于30个实际血清样品的分析检测，共检出4种多溴二苯醚和2种羟基多溴二苯醚，其赋存特征与已有报道一致。结果表明本方法可应用于大批量实际样品的分析检测，具有较强的实用价值。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法。

背景技术

多溴二苯醚(PBDEs)是一类人工合成的溴代阻燃剂，该类化合物生产量大，被广泛应用于塑料制品、电器/气设备，耐火聚合物以及多种日常生活用品中。该类物质的主要商品化组分已陆续被列为持久性有机污染物。

近年来，Hydroxylated-PBDEs(OH-PBDEs)和Methoxylated-PBDEs(MeO-PBDEs)被认为是PBDEs的主要代谢产物。Stapleton等对人体肝细胞体外暴露的实验表明在人体内肝脏很有可能会对部分PBDEs单体进行代谢，OH-PBDEs是重要的代谢产物。Athanasiadou等采集了尼加拉瓜Managua市11到15岁青少年血清样品，并从中检出了PBDEs和OH-PBDEs，发现PBDEs的暴露水平与OH-PBDEs暴露水平显著相关，且羟基的引入使得OH-PBDEs更易于在人体血液累积。Haraguchi等于2016年首次报道了日本女性血清样品中PBDEs和OH-PBDEs的含量，在检测出的OH-PBDEs单体中，6-OH-BDE-47(平均浓度：183pg/g湿重)比BDE-47浓度(平均浓度：8.7pg/g湿重)高20倍以上，研究认为海产品的摄入是人体内高浓度OH-PBDEs的重要来源。我国沿海城市大连女性血清样品中同样检出了PBDEs和OH-PBDEs，且同样存在OH-PBDEs浓度大于母体PBDEs的特征。以上研究均表明：PBDEs和OH-PBDEs在人体中有一定程度的累积。

目前，环境介质中PBDEs和OH-PBDEs的分析检测通常采用气相色谱质谱法和液相色谱质谱法。针对血清/尿液样品中污染物的前处理，应用最为广泛的是固相萃取(SPE)技术，部分研究中对血清样品的测定采用将OH-PBDEs衍生化后通过气相色谱质谱法进行检测。由于血清样品属于损伤性采样，样品量极为有限，不同类型化合物分析条件的不同增加了样品用量，很难满足进行多次处理分析的需求，因此亟待开发减量化分析方法。

发明内容

为克服现有技术存在的问题，本申请结合在线固相萃取-高效液相色谱和电感耦合等离子体质谱技术(Online SPE-HPLC-ICP-MS)的优势，建立了对PBDEs和OH-PBDEs同时定量分析的新方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种Online SPE-HPLC-ICP-MS同时测定血清中多溴二苯醚及其羟基代谢产物的方法，包括如下步骤：

对血清样品进行分析前，先对样品进行预处理，步骤如下：向血清样品中加入等体积乙腈，待蛋白沉淀后加入超纯水稀释；在4℃条件下，以10000rpm高速离心，收集上清液转移至进样瓶中待测；

利用Online SPE-HPLC-ICP-MS对上清液进行分析，其中：

在线固相萃取条件：设定左泵为上样富集泵，右泵为分析泵，所述上清液在3.0mL/min，100％水相的条件下，通过进样系统上样到25μm*4.6mm*20mm的在线固相萃取柱，采用体积比为甲醇：乙腈：水＝54：26：20混合溶剂进行洗脱，洗脱时间为5min，洗脱流速为1.0mL/min；

色谱条件：选用规格为4.6×250mm，5μm的C18色谱柱；