[发明专利]一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序

权利要求书

1.一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒，其特征在于，包括如下组分：过氧化物酶封闭剂、组合一抗试剂、组合二抗试剂、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、快红显色剂、活化剂、快红缓冲液、苏木素复染液；所述组合一抗试剂包括鼠抗人k轻链单克隆抗体、兔抗人λ轻链单克隆抗体和兔抗人细胞周期蛋白D1单克隆抗体；所述组合二抗试剂包括HRP标记的抗鼠二抗聚合物和AP标记的抗兔二抗聚合物。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗试剂中的鼠抗人k轻链单克隆抗体的克隆号为L1C1，抗体效价为：1:50-1:200。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗试剂中的兔抗人λ轻链单克隆抗体的克隆号为EP172，抗体效价为：1:100-1:300。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗试剂中的兔抗人细胞周期蛋白D1单克隆抗体的克隆号为EP12，抗体效价为1:50-1:200。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合一抗试剂还包括6g/L的三羟甲基氨基甲烷、10g/L的牛血清蛋白、8g/L的氯化钠、0.2g/L的果绿色素和质量浓度为0.15％的Proclin950。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组合二抗试剂由浓度为8-15μg/mL的HRP标记的抗鼠二抗聚合物、浓度为6-12μg/mL的AP标记的抗兔二抗聚合物、6g/L的三羟甲基氨基甲烷、8g/L的氯化钠、5g/L的牛血清蛋白、质量浓度为0.1％的吐温20、质量浓度为0.1％的Proclin950组成。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，其适用于全自动免疫组化染色机，染色程序包括如下步骤：

1)石蜡组织切片脱蜡水化；

2)抗原修复：采用pH为9.0的Tris-EDTA修复缓冲液对切片进行高温修复，温度为92-100℃，修复20-30分钟；

3)滴加过氧化物酶封闭剂进行内源性过氧化物酶的封闭，常温孵育5-10分钟，加样量为50-100微升；

4)组合一抗试剂的孵育：20-37℃孵育30-60分钟，加样量为50-100微升；

5)组合二抗试剂的孵育：20-37℃孵育20-30分钟，加样量为50-100微升；

6)快红显色液的孵育：常温孵育5-10分钟，加样量为50-100微升；快红显色剂的配置：快红显色剂、活化剂和快红缓冲液按照1：1：30的比例配置所得；

7)DAB显色液的孵育：常温孵育3-5分钟，加样量为50-100微升；DAB显色液的配置：DAB显色底物和DAB显色缓冲液1：20比例配制所得；

8)衬染：苏木素常温孵育1-3分钟，加样量为50-100微升；

9)水性封片胶封片。