[发明专利]一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序

说明书

本发明涉及一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序。本发明提供的试剂盒包括如下组分：过氧化物酶封闭剂、组合一抗试剂、组合二抗试剂、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、快红显色剂、活化剂、快红缓冲液、苏木素复染液；所述组合一抗试剂包括鼠抗人k轻链单克隆抗体、兔抗人λ轻链单克隆抗体、兔抗人细胞周期蛋白D1单克隆抗体；所述组合二抗试剂包括HRP标记的抗鼠二抗聚合物、AP标记的抗兔二抗聚合物。该试剂盒能够在一张组织样本切片上同时呈现三个抗原靶标的表达情况，便于观察靶标蛋白质的相互作用和共生定位，对组织样本的需求量显著降低；且该试剂盒能够应用于自动化染色机，显著提高准确度和可重复性，简便高效。

技术领域

本发明属于临床病理检测技术领域，具体涉及一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序。

背景技术

淋巴瘤是一种起源于淋巴结和结外淋巴组织的免疫系统恶性肿瘤。依据肿瘤的组织学特点，将淋巴瘤分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。依据肿瘤细胞起源的不同，非霍奇金淋巴瘤可分为B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和NK细胞淋巴瘤，其中，套细胞淋巴瘤是B细胞淋巴瘤的一种亚型，该疾病恶性程度高、预后差。

K轻链(Kappa Light Chain)和λ轻链(Lambda Light China)可标记带有轻链的B淋巴细胞、浆细胞和免疫母细胞，它们是免疫球蛋白上的两条肽链。在正常情况下，轻链和重链的表达是平衡的，可形成完整的免疫球蛋白分子。在正常的淋巴结中，表达不同轻链的B细胞数K轻链：λ轻链为2:1，如果例K轻链：λ轻链比例大于3或者λ轻链：K轻链的比例大于2，或者单个指标的表达细胞量大于73％，则表示淋巴增生性失调。B细胞淋巴瘤中，K轻链蛋白和λ轻链蛋白常常成限制性表达，是B细胞单克隆增生的标志。但是，对于套细胞淋巴瘤而言，其早期病变常常有局限性，混杂多量反应性增生的淋巴细胞，其中含有较多的浆细胞，仅仅计算K轻链蛋白和λ轻链蛋白的比值来确定限制的轻链类型不太可靠，常常还需要参考其他指标，才能较准确地确定肿瘤细胞的准确位置和限制性轻链的类型。

目前，在套细胞淋巴瘤疾病的检测主要依赖于免疫组织化学法，利用合适的免疫组化抗体来检测抗原靶标，通过不同指标的表达情况来鉴别疾病的分型。该方法的特点是：①每个靶标的检测需要一张组织切片；②应用常规免疫显色试剂，显示一种颜色，显色为棕色，该方法的原理为：利用抗体与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，再通过辣根过氧化物酶(HRP)标羊抗鼠/兔聚合物与抗原抗体复合物中的抗体结合，最后HRP催化二氨基联苯胺(DAB)在抗原部位形成棕色沉淀，借助显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞的结构；③需要判读多张切片的染色结果，综合分析，得到病理诊断结果。该技术为传统免疫组化的检测方法，单个样本的染色切片数量多，技术操作和病理医师阅片的工作量大，对取材样本的大小要求高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于鉴别套细胞淋巴瘤的免疫组化多重染色试剂盒及染色程序，该试剂盒能够在一张组织切片上同时呈现三个抗原靶标的表达情况，便于病理医生观察靶标蛋白质的相互作用和共生定位，并避免微小组织样本染色重复性差的问题。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种免疫组化联合弹性纤维双重染色试剂盒，包括如下组分：过氧化物酶封闭剂、组合一抗试剂、组合二抗试剂、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、快红显色剂、活化剂、快红缓冲液、苏木素复染液；所述组合一抗试剂包括鼠抗人k轻链单克隆抗体、鼠抗人λ轻链单克隆抗体、兔抗人细胞周期蛋白D1单克隆抗体；所述组合二抗试剂包括HRP标记的抗鼠二抗聚合物、AP标记的抗兔二抗聚合物。

优选的，所述组合一抗试剂中的鼠抗人k轻链单克隆抗体的克隆号为L1C1，抗体效价为：1:05-1:200。

优选的，所述组合一抗试剂中的鼠抗人λ轻链单克隆抗体的克隆号为EP172，抗体效价为：1:100-1:300。