[发明专利]一种对乙型肝炎病毒进行基因分型的荧光PCR试剂盒

说明书

本发明公开了一种对乙型肝炎病毒进行基因分型的荧光PCR试剂盒。本发明提供了引物探针组合：检测乙型肝炎病毒A型的引物探针组由序列1所示的引物HBV‑A‑F、序列2所示的引物HBV‑A‑R和序列3所示的探针HBV‑A‑P组成；检测乙型肝炎病毒B型的引物探针组由序列4所示的引物HBV‑B‑F、序列5所示的引物HBV‑B‑R和序列6所示的探针HBV‑B‑P组成；检测乙型肝炎病毒C型的引物探针组由序列7所示的引物HBV‑C‑F、序列8所示的引物HBV‑C‑R和序列9所示的探针HBV‑C‑P组成；检测乙型肝炎病毒D型的引物探针组由序列10所示的引物HBV‑D‑F、序列11所示的引物HBV‑D‑R和序列12所示的探针HBV‑D‑P组成。本发明适宜市场化的广泛推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种对乙型肝炎病毒进行基因分型的荧光PCR试剂盒，具体涉及对乙型肝炎病毒进行A基因型、B基因型、C基因型或D基因型分型的引物探针组合以及试剂盒。

背景技术

根据全基因序列异质性≥8％或S基因序列异质性≥4％，可将HBV分为8种基因型(A～H)。HBV基因型呈一定地理区域分布，不同基因型HBV的临床感染特点和致病性不同。HBV的基因型影响肝脏疾病的自然史、严重程度、HBeAg的血清转化率、前核心/核心启动子区的变异形式以及抗病毒药物的疗效。

HBV基因型别存在较明显的地域性分布特点：A型(即A基因型)在欧洲和中部非洲多见；B型(即B基因型)、C型(即C基因型)主要分布于亚洲；D型(即D基因型)分布区域最广，流行于地中海、中东等地区；E型(即E基因型)以非洲为主；G型(即G基因型)仅见于美国和欧洲；F型(即F基因型)、H型(即H基因型)分布在美国。我国以B型和C型分布为主，为优势型，且存在南北差异，北方以C型为优势型，南方以B型为优势型；D型多分布于如新疆、西藏、宁夏等少数民族地区，偶有A、E、F型报道，尚未见G、H型。有研究表明，HBV存在不同基因型别的混合感染。

乙型病毒性肝炎是长期困扰全球医学界的难题，是急慢性肝炎、肝硬化、肝癌的重要致病因子之一，也是全世界最严重的公共卫生问题之一。据WTO报告，全球60多亿人口中，有大约30亿人口生活在乙型肝炎病毒(HBV)高流行地区，超过20亿人感染过HBV，其中慢性感染者超过3.5亿。我国每年的乙肝发病率在6000万人次以上，是一个乙型病毒性肝炎发病大国。在中国、东南亚和非洲等国家和地区，有约50％的肝硬化和70～90％的肝癌，是由慢性HBV感染引起，而感染了HBV变异体的HBV携带者有7～30％。

传统的HBV检测方法主要有血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金标记试验和放射免疫(RIA)检测血清标本中的HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBc、抗HBe等五项指标，特别是ELISA法检测肝炎病毒抗原、抗体，其灵敏度接近于RIA法，且不需要昂贵的仪器，没有放射性污染，所以目前在国内外普遍应用。但ELISA法检测血清学是表型指标，只能提供体内HBV感染的间接证据，难以确定HBV DNA的具体基因型。

开发能实现快速、有效且准确检测并分型HBV的产品，以用于HBV分型定性检测，对HBV感染患者的治疗提供参考具有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种对乙型肝炎病毒进行基因分型的荧光PCR试剂盒。

本发明提供了引物探针组合，包括如下4个引物探针组：

用于检测乙型肝炎病毒A型的引物探针组由序列表的序列1所示的引物HBV-A-F、序列表的序列2所示的引物HBV-A-R和序列表的序列3所示的探针HBV-A-P组成；

用于检测乙型肝炎病毒B型的引物探针组由序列表的序列4所示的引物HBV-B-F、序列表的序列5所示的引物HBV-B-R和序列表的序列6所示的探针HBV-B-P组成；