[发明专利]一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202110261349.0 | 申请日： | 2021-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN115073557A | 公开（公告）日： | 2022-09-20 |
| 发明（设计）人： | 张强;钱泓;吴有强;贾宝琴;徐玉兰;闻雪 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/01 | 分类号： | C07K14/01;C12N15/34;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司 11042 | 代理人： | 付晓青;李广文 |
| 地址： | 312366 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 纯度 非洲 猪瘟 病毒 pk205r 单位 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白，其特征在于，所述重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白为非洲猪瘟病毒蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.如权利要求1所述的重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白，其特征在于，密码子优化后的所述重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
3.一种制备如权利要求1～2任一所述的重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)重组杆状病毒获得：将密码子优化后的非洲猪瘟病毒pK205R蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的表达基因克隆到转移载体pBacPAK8中，然后与线性化的DNA质粒共转染昆虫细胞，得到含有非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白表达基因的重组杆状病毒；
2)发酵培养：再将所述重组杆状病毒进行扩大培养后进行发酵，收集培养液；
3)亚单位蛋白纯化：对步骤2)中所述培养液进行纯化，纯化后得到重组的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位可溶性蛋白。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述昆虫细胞为sf9细胞和/或HighFive5细胞。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述发酵培养的细胞为sf9细胞和/或HighFive5细胞。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，将所述重组杆状病毒进行扩大培养的方法包括以下步骤：
2-1)将所述重组杆状病毒转染sf9细胞和/或HighFive5细胞，培养72h，得到P1代重组杆状病毒；
2-2)将所述第一代重组杆状病毒转染sf9细胞和/或HighFive5细胞，培养72h，得到P2代重组杆状病毒；
2-3)重复转染sf9细胞和/或HighFive5细胞的步骤，获得Pn代重组杆状病毒。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2-3)中，所述n为自然数。
8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，使用镍柱对所述培养液进行纯化。
9.一种如权利要求1-2任一权利要求所述的重组高纯度的非洲猪瘟病毒pK205R亚单位蛋白在制备用于预防、诊断和治疗非洲猪瘟病毒感染的疫苗中的应用。
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