[发明专利]一种重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202110261350.3 | 申请日： | 2021-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN115073558A | 公开（公告）日： | 2022-09-20 |
| 发明（设计）人： | 张强;钱泓;吴有强;贾宝琴;徐玉兰;闻雪 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/01 | 分类号： | C07K14/01;C07K19/00;C12N15/34;C12N15/70;G01N33/569;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司 11042 | 代理人： | 付晓青;李广文 |
| 地址： | 312366 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 非洲 猪瘟 病毒 dp96r 单位 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白，其特征在于，所述重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白为非洲猪瘟病毒毒力蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白，其特征在于，在如SEQID NO.3所示的氨基酸序列的氨基末端或羧基末端连接有poly-His、FLAG、c-myc、HA和poly-Arg中的一种标签。
3.根据权利要求1或2所述的重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白，其特征在于，密码子优化后的所述重组的非洲猪瘟病毒DP96R蛋白基因序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种制备如权利要求1～3任一所述重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)将密码子优化后的所述重组的非洲猪瘟病毒DP96R蛋白如SEQ ID NO.1所示的编码基因序列克隆到原核表达载体中，得到含有非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白编码基因的重组质粒；
2)再将所述含有非洲猪瘟病毒DP96R亚单位蛋白编码基因的重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中，得到重组工程菌；
3)通过培养、筛选步骤2)中所述重组工程菌的菌株，得到高度表达的菌株；
4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的菌株，纯化后得到重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位可溶性融合蛋白。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述原核表达载体选自pET30、pET28a、pBAD、pcold、pQE、pKK载体中的一种。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述原核表达载体选自pET30。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌选自arcticexpress、BL21(DE3)、BL21 star(DE3)中的一种。
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述大肠杆菌菌株使用arcticexpress。
9.一种如权利要求1～3任一所述的重组的非洲猪瘟病毒DP96R亚单位可溶性融合蛋白在制备诊断、预防和治疗非洲猪瘟的疫苗中的应用。
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