[发明专利]一种治疗A型血友病的基因编辑系统及其应用有效

专利信息
申请号: 202110262182.X 申请日: 2021-03-10
公开(公告)号: CN113025659B 公开(公告)日: 2023-01-10
发明(设计)人: 程涛;张健萍;赵梅;殷梦迪;李斯昂;赵娟娟;许静;杨智学;张凤;张孝兵 申请(专利权)人: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
主分类号: C12N15/864 分类号: C12N15/864;C12N5/10;A61K48/00;A61P7/04
代理公司: 北京品源专利代理有限公司 11332 代理人: 巩克栋
地址: 300020 *** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 治疗 血友病 基因 编辑 系统 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种基因编辑系统,其特征在于,所述基因编辑系统包括CRISPR-SaCas9基因编辑载体和F8供体载体;

所述CRISPR-SaCas9基因编辑载体包括串联的SaCas9编码基因和sgRNA;

所述F8供体载体包括截短型F8基因,所述截短型F8基因为缺失了B结构域的F8基因;

所述sgRNA的靶基因包括Alb基因第11号内含子和/或Alb基因第13号内含子;

所述SaCas9编码基因和所述sgRNA之间还包括Wpre;

所述Wpre和sgRNA的启动子之间还包括PolyA或miR-142-3p靶序列;

所述sgRNA为SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:25之一所示的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的基因编辑系统,其特征在于,

所述SaCas9编码基因的启动子和所述sgRNA的启动子不同;

所述SaCas9编码基因的启动子为肝细胞特异性启动子;

所述sgRNA的启动子为U6启动子;

所述F8供体载体包括截短型F8基因和天门冬酰胺糖基化位点的融合基因;

所述F8供体载体在截短型F8基因上游还包括剪接受体序列;

所述剪接受体序列和截短型F8基因之间还包括自断裂多肽基因;

所述F8供体载体在截短型F8基因下游还包括PolyA序列。

3.根据权利要求2所述的基因编辑系统,其特征在于,

所述肝细胞特异性启动子为SEQ ID NO:31~33之一所示的核酸序列;

所述U6启动子为SEQ ID NO:34所示的核酸序列;

所述Wpre为SEQ ID NO:35所示的核酸序列;

所述PolyA为SEQ ID NO:36所示的核酸序列;

所述miR-142靶序列为SEQ ID NO:37~39之一所示的核酸序列。

4.根据权利要求2所述的基因编辑系统,其特征在于,所述天门冬酰胺糖基化位点为SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列;

所述截短型F8基因和天门冬酰胺糖基化位点的融合基因为SEQ ID NO:41所示的核酸序列;

所述剪接受体序列包括Alb第13号内含子的部分序列和第14号外显子的部分序列;

所述剪接受体序列的长度为65~135bp;

所述剪接受体序列为SEQ ID NO:42~49之一所示的核酸序列;

所述自断裂多肽基因为SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1-4任一项所述的基因编辑系统,其特征在于,所述CRISPR-SaCas9基因编辑载体和F8供体载体的空载体为腺相关病毒载体。

6.根据权利要求5所述的基因编辑系统,其特征在于,所述CRISPR-SaCas9基因编辑载体和F8供体载体的空载体为AAV2载体、AAV5载体、AAV6载体、AAV8载体或AAV9载体中的任意一种或至少两种的组合。

7.根据权利要求6所述的基因编辑系统,其特征在于,所述CRISPR-SaCas9基因编辑载体和F8供体载体的空载体为AAV8载体。

8.一种腺相关病毒组合物,其特征在于,所述腺相关病毒组合物包括CRISPR-SaCas9基因编辑腺相关病毒和F8供体腺相关病毒;

所述CRISPR-SaCas9基因编辑腺相关病毒由转染有权利要求1-7任一项所述的基因编辑系统中的CRISPR-SaCas9基因编辑载体和辅助质粒的哺乳动物细胞制备得到;

所述F8供体腺相关病毒由转染有权利要求1-7任一项所述的基因编辑系统中的F8供体载体和辅助质粒的哺乳动物细胞制备得到;

所述腺相关病毒组合物中CRISPR-SaCas9基因编辑腺相关病毒和F8供体腺相关病毒的剂量比为1:(2.5~10)。

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