[发明专利]一种利用正向调控基因构建高产纤维素酶菌株的方法及应用在审
| 申请号： | 202110262850.9 | 申请日： | 2021-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN113151264A | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 杨明;李秋园;代淑梅 | 申请（专利权）人： | 上海中溶科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/31;C12N15/80;C12N1/19;C12N9/42;C12R1/885 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 200000 上海市浦东新区中国(上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 正向 调控 基因 构建 高产 纤维素酶 菌株 方法 应用 | ||
1.一种强启动子PpgdA，其特征在于，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种含有PpgdA基因的重组质粒，其特征在于，将PpgdA基因连接到质粒载体上得到的新的重组质粒，所述PpgdA基因碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种含有PpgdA基因的重组表达转化体，其特征在于，将权利要求2所述含有PpgdA基因的重组质粒转化至相应宿主细胞中制得。
4.一种同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒，其特征在于，所述同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒，是指将PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因连接到质粒载体上得到的新的重组质粒，所述PpgdA基因碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述正向调控基因Xyr1基因序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种如权利要求4所述同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒的获得方法，其特征在于，
将含有PpgdA基因的重组质粒pGPDA-hph质粒进行EcoR V单酶切，然后对酶切后的质粒进行去磷酸化，最后采用Gibson连接方法将Xyr1基因连接到pGPDA-hph载体上，得到新的重组质粒pGPDA-hph-Xyr1。
6.一种同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组表达转化体，其特征在于，是将权利要求4所述同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒转化至相应宿主细胞中制得的表达转化体。
7.一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株是：将权利要求6所述同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组表达转化体转化到里氏木霉中，所得到的重组菌株。
8.根据权利要求7所述一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株的保藏编号为CGMCCNo.21432，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2021年1月19日。
9.根据权利要求7所述一种重组菌株，其特征在于，获得所述重组菌株使用的出发菌株为保藏编号为CGMCC NO.17798的里氏木霉(Trichoderma reesei)。
10.一种如权利要求7所述重组菌株的应用，其特征在于，所述重组菌株用于产纤维素酶。
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