[发明专利]一种免疫药物的制备方法

权利要求书

1.一种免疫药物的制备方法，所述免疫药物为包含特异性结合蛋白（11）和核酸适配体（12）的双特异性免疫药物（1），且特异性结合蛋白（11）和核酸适配体（12）之间间接连接，所述特异性结合蛋白（11）本身为蛋白质结构，所述核酸适配体（12）本身为核酸结构，所述特异性结合蛋白（11）用于与免疫细胞受体或靶细胞受体特异性结合，相应地，所述核酸适配体（12）用于与靶细胞受体或免疫细胞受体特异性结合；所述特异性结合蛋白（11）和核酸适配体（12）之间连接有共价连接蛋白（13）和共价连接DNA（14），所述共价连接蛋白（13）与特异性结合蛋白（11）直接或间接连接，所述共价连接DNA（14）直接或间接与核酸适配体（12）连接，且共价连接蛋白（13）和共价连接DNA（14）之间共价结合；所述核酸适配体（12）处的核酸结构包括 Y 型 DNA 纳米粒子和树枝状 DNA 纳米粒子中的任意一种，所述 Y 型 DNA纳米粒子中包含 2 个核酸适配体（12），所述树枝状 DNA 纳米粒子中包含 3~100 个核酸适配体（12），所述 Y 型 DNA 纳米粒子和所述树枝状 DNA 纳米粒子中包含的核酸适配体（12）均相同或不同；所述特异性结合蛋白（11）为αCD3，所述共价连接蛋白（13）为DCV蛋白，所述共价连接DNA（14）的序列为aagtattaccagaaa；所述制备方法包括如下步骤，

步骤A：制备得到含有所述特异性结合蛋白（11）和共价连接蛋白（13）的融合蛋白；

步骤B：制备得到含有所述核酸适配体（12）和共价连接DNA（14）的核酸结构；

步骤A和步骤B可以同时进行或者任意先后；

步骤C：将步骤A制备得到的融合蛋白和步骤B得到的核酸结构共同孵育，使得其中的共价连接蛋白（13）和共价连接DNA（14）共价结合，得到所述免疫药物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A中，首先全基因合成所述融合蛋白的核酸序列并构建重组质粒，再通过大肠杆菌原核表达有活性的融合蛋白。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A后，还包括纯化所得的融合蛋白。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤B中，所述核酸结构还包括用于连接核酸适配体（12）和共价连接DNA（14）的连接结构，所述连接结构同样由核苷酸构成。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤B中，通过无酶自组装过程制备Y型DNA纳米粒子，通过聚合链式反应体外合成所述树枝状DNA纳米粒子。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤C中，所述孵育方法为将步骤A制备得到的融合蛋白和步骤B得到的核酸结构混合后在36~38℃的条件下孵育10分钟以上得到免疫药物，再将得到的免疫药物在2~8℃的条件下保存备用。

7.根据权利要求1~6中任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述核酸适配体（12）为包含sgc8、TE02、SYL3C、MUC1以及C-MET中的一种或多种。