[发明专利]一种免疫药物的制备方法

说明书

本发明提供一种免疫药物的制备方法，包括先制备得到含有特异性结合蛋白和共价连接蛋白的融合蛋白；且制备得到含有核酸适配体和共价连接DNA的核酸结构；然后将上述得到的融合蛋白和核酸结构共同孵育，使得其中的共价连接蛋白和共价连接DNA共价结合，得到所述免疫药物。本发明拓宽了免疫治疗药物的类型，由目前的蛋白类双特异性抗体演化为DNA参与的嵌合形式。本发明的制备方法克服了传统双特异性抗体必须经过基因工程的缺点，缩短了免疫药物的合成制备时间，降低了生产成本。本发明以核酸适配体作为靶细胞识别元件，依靠其可以多价组合的优势，因而肿瘤识别类型多样，提升了与肿瘤细胞结合的亲和力和特异性，扩大了识别范围。

技术领域

本发明涉及肿瘤免疫治疗药物技术领域，具体提供了一种介导T细胞靶向杀伤肿瘤细胞的新型免疫治疗药物、其制备方法及其在肿瘤免疫治疗中的应用。

背景技术

癌症免疫治疗能激活患者的免疫系统，以防止癌症的免疫逃避，在长期减少癌症转移和复发方面有很大的潜力。与传统的化疗或放疗不同，肿瘤免疫治疗在肿瘤治疗中具有更高的选择性和更低的毒性，同时通过免疫记忆提供了长期的免疫。最近研究表明，T细胞可以通过结合肿瘤特异性抗原的双特异性分子来重新定向识别和消除肿瘤。其中由于双特异性T细胞接合(Bispecific T-cell engager，BiTE)抗体介导杀伤时能够绕过MHC限制选择性杀死肿瘤细胞等优势引起了人们的特别关注。BiTE本质为一个多肽链，包含两个不同抗体的单链(sc)Fv结构域，其中一个单链抗体结构域用来识别任何T细胞上表达的CD3e，另一个单链抗体用来结合肿瘤细胞表达的肿瘤相关抗原。尽管它们取得了显著的成功，但由于BiTE属于蛋白类药物，用于治疗不同肿瘤细胞的BiTE必须依靠现有的DNA序列进行基因工程改造，该过程不仅耗时耗力且其稳定性和活性无法得到保证。同时无法快速根据病人实际情况实现定制化医疗。此外，体内是多细胞环境，肿瘤细胞与正常细胞表面分子类型相同，仅有表达量的差异，目前由于BiTE结构组成固定，致使其免疫治疗过程中会杀伤正常细胞，存在一定的副作用。从这个角度来看，核酸适配体(aptamer)可以解决现有BiTE存在的问题。适配体被称为“化学抗体”，因其体积小，易于制备，且具有良好的靶向性，因此被认为是肿瘤靶向治疗的理想选择。以此扩大癌症治疗范围，加快药物生成研发过程。另外核酸适配体还能够依靠碱基互补配对原则与其他DNA在试管中快速组装成DNA纳米结构。DNA纳米结构因其可编程性、易修饰性和高生物相容性广泛应用于生物医学领域。且其不同结构能结合不同数目的核酸适配体，从而能提高肿瘤识别能力，减少免疫治疗副作用。

因此本领域迫切需要开发出一种利用核酸识别肿瘤细胞表面分子的免疫药物及其制备方法，用于解决现有免疫疗法研发费时费力，治疗对象有限且有副作用的问题。

发明内容

本发明中，用核酸适配体替代目前BiTE中一个抗体结构域用于识别肿瘤细胞表面分子，我们研发得到的抗体-核酸嵌合体作为一种新型双特异性药物能够解决现有技术中的问题。

因此，本发明首先提供一种免疫药物，所述免疫药物为包含特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)的双特异性免疫药物(1)，且特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12) 之间使用直接或间接的方式连接，所述特异性结合蛋白(11)本身为蛋白质结构，所述核酸适配体(12)本身为核酸结构，所述特异性结合蛋白(11)用于与免疫细胞受体或靶细胞受体特异性结合，相应地，所述核酸适配体(12)用于与靶细胞受体或免疫细胞受体特异性结合。

在一种具体的实施方式中，所述特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间连接有共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14)，所述共价连接蛋白(13)与特异性结合蛋白(11)连接，所述共价连接DNA(14)直接或间接与核酸适配体(12)连接，且共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14)之间共价结合。

在一种具体的实施方式中，所述共价连接DNA(14)与核酸适配体(12)之间还连接有连接结构，所述连接结构同样由核苷酸构成。