[发明专利]海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A及制备和用途

权利要求书

1.一种海洋抗胶质瘤天然活性物质链霉萘啶A，其特征在于，其化学结构式为：

。

2.一种链霉菌，分类命名为Streptomycessp. SY2111，已被中国典型培养物保藏中心-武汉中心保藏，保藏编号: CCTCC M 2021154。

3.权利要求1所述的链霉萘啶A的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）链霉菌Streptomycessp. SY2111的分离培养

取海底沉积物用灭菌自来水溶解后摇床振荡过夜，将样品混悬液稀释，取样品稀释液均匀分散到含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下培养后,将不同的菌落分别转移到另一含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下继续培养，最后将生长良好的单一菌落SY2111接种到斜面培养基培养后置4℃冰箱保存备用；

（2）链霉菌Streptomycessp. SY2111的菌种鉴定

将步骤（1）分离培养所获得的单一菌落SY2111用目前实验室普遍使用的16S rDNA序列分析方法鉴定其种类，确定为链霉菌，分类命名为Streptomycessp. SY2111，已被中国典型培养物保藏中心-武汉中心保藏，保藏编号: CCTCC M 2021154；

（3）链霉菌Streptomycessp. SY2111培养物的制备

将步骤(2)获得的链霉菌Streptomycessp. SY2111的菌株接种到液体培养基中，将培养液在室温条件下振荡培养后得到菌种液，最后将菌种液转入固体大米培养基中，在室温静置培养后，得到含有抗胶质瘤活性化合物链霉萘啶A的SY2111固体发酵产物；

（4）链霉萘啶A的提取分离纯化

将步骤（3）获得的固体发酵产物用乙酸乙酯提取得到乙酸乙酯总提取物，将乙酸乙酯总提取物先用硅胶柱层析分离，用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂以及乙酸乙酯和甲醇混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液，用薄层层析检测各组分，合并含有相同成分的组分，得到A~F六个组分，组分F再用十八烷基硅烷键合硅胶柱层析分离, 分别用30%、50%、70%和100%的甲醇洗脱，得到组分F1~F4，最后，组分F1用制备型高效液相色谱分离纯化得到纯化合物链霉萘啶A。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的海底沉积物是从马里亚拉海沟7281米深的海域获得；所述样品稀释液的浓度为1×10^-4~1×10^-2 g/mL；所述培养皿和斜面培养的固体培养基均为高氏琼脂培养基；所述的室温培养温度为20~28℃；所述的固体培养基中的培养时间为7~14天。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的液体培养基为高氏液体培养基，所述的固体大米培养基为大米40 克和海水60毫升；所述的室温培养温度为20~28℃；所述的菌种培养时间为4~6天，大米培养基的培养时间为50~60天。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，高氏液体培养基由可溶性淀粉20 克,硝酸钾 1 克, 七水合硫酸镁0.5 克, 磷酸氢二钾0.5 克, 氯化钠 0.5 克, 硫酸亚铁0.01克, 天然海水1升组成。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述硅胶柱层析的硅胶用量与上柱的样品量比例是10~15克: 1.0 克；所述的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度为10:1、5:1、2:1、1:1和0:1，乙酸乙酯和甲醇混合溶剂梯度为5:1和1:1；所述的十八烷基硅烷键合硅胶柱层析的ODS用量与上柱的样品量比例是20~30克：1.0 克；所述的制备型高效液相色谱分离条件是：创新通恒CXTH-3000高效液相色谱仪，富士C₁₈ CT-30 色谱柱 280×30 mm，10μm，甲醇和水为流动相，检测波长210 nm，流速为10.0 mL/min。

8.权利要求1所述的链霉萘啶A在制备抗胶质瘤药物中的应用，其特征在于，所述胶质瘤为胶质瘤U251和U87MG。