[发明专利]一种用于分离柠檬酸和异柠檬酸的衍生试剂盒和方法

说明书

本发明公开一种用于分离柠檬酸和异柠檬酸的衍生试剂盒和方法，属于化学分析领域。所述试剂盒包括衍生试剂，所述衍生试剂为C3‑C6醇类，即甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或己醇，进一步地，所述衍生试剂为正构醇或异构醇。利用本发明的试剂盒对样本中柠檬酸和异柠檬酸进行衍生化后，进一步通过液相色谱质谱技术，实现柠檬酸和异柠檬酸的分离，便于后续分析或检测。利用本发明的试剂盒和方法，通过对受试者尿液样本进行检测，可以准确定量柠檬酸含量，从而提高泌尿结石诊断的准确性和灵敏度，具有重要的临床意义和巨大的经济价值。

技术领域

本发明属于化学分析领域，具体地，涉及一种用于分离柠檬酸和异柠檬酸的衍生试剂盒和方法。

背景技术

柠檬酸(CA)，又名枸橼酸，分子式分为CHO，是发生在线粒体中的TCA循环的关键中间产物。它由草酰乙酸结合乙酰辅酶A(产生于糖酵解途径)上的乙酰基团而形成.柠檬酸可以被运出线粒体重新变回乙酰辅酶A，用于脂肪酸的合成。柠檬酸是连接脂肪酸合成和糖酵解途径的桥梁。

柠檬酸在体内的代谢路径和处理方式随着性别、年龄以及各种其它因子的不同也会千差万别。研究发现，体液中柠檬酸含量也跟很多疾病的发生息息相关，从而使得柠檬酸成为多种疾病的诊断标志物。

然而，由于柠檬酸还有一种同分异构体——异柠檬酸(图1)，通常与柠檬酸同时存在中体液中，以往检测方法中，常常无法将柠檬酸和异柠檬酸分离，造成两者混为一体进行检测，造成检测误差，甚至造成误诊、漏诊。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种用于分离柠檬酸和异柠檬酸的试剂盒，所述试剂盒包括衍生试剂，所述衍生试剂为C3-C6醇类。

进一步地，利用高效液相色谱法进行所述分离柠檬酸和异柠檬酸。

在本发明的一些实施方案中，所述C3-C6醇类是指具有3～6个C原子的醇类，即丙醇、丁醇、戊醇或己醇。利用醇类进行衍生，由于醇类能够扩展分子的结构，可将柠檬酸与异柠檬酸内部的羟基暴露出来，扩大因羟基位置差异而使柠檬酸与异柠檬酸与色谱填料之间作用力的差异，从而达到完全基线分离的目的。同时由于衍生化后能够提高质谱的响应，能够进一步的提高柠檬酸和异柠檬酸的检测灵敏度。

进一步地，所述醇类为正构醇或异构醇。

在本发明的一些实施方案中，所述丙醇为1-丙醇(正丙醇)或2-丙醇(异丙醇)。

在本发明的一些实施方案中，所述丁醇为1-丁醇(正丁醇)、2-丁醇(仲丁醇)、2-甲基-1-丙醇(异丁醇)或2-甲基-2-丙醇(叔丁醇)。

在本发明的一些实施方案中，所述戊醇为1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇，2-甲基-2-丁醇，3-甲基-2-丁醇，3-甲基-1-丁醇或2,2-二甲基-1-丙醇。

在本发明的一些实施方案中，所述己醇为1-己醇、2-己醇、3-己醇、2-甲基-1-戊醇、2-甲基-2-戊醇、2-甲基-3-戊醇、2-甲基-4-戊醇、2-甲基-5-戊醇、3-甲基-1-戊醇、3-甲基-2-戊醇、3-甲基-3-戊醇、2,2-二甲基-1-丁醇、2,2-二甲基-3-丁醇、2,2-二甲基-4-丁醇、2,3-二甲基-1-丁醇或2,3-二甲基-2-丁醇。

在本发明的一些具体实施方案中，所述衍生试剂为正丁醇。

本发明第二方面提供一种分离柠檬酸和异柠檬酸的方法，包括以下步骤：

S1，利用衍生试剂对包含柠檬酸和异柠檬酸的样本进行衍生；

S2，利用高效液相色谱对衍生后的样本进行分离，收集保留时间为2.5-2.8min的组分，为异柠檬酸；收集保留时间为2.85-3.25min的组分，为柠檬酸，