[发明专利]含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体、人RBP免疫层析检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有一株RBP单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体；所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫；所述标记物垫上包被有含氨基或羧基基团物质标记的另一株RBP单克隆抗体和标记物标记的兔IgG；所述含氨基或羧基基团物质标记的另一株RBP单克隆抗体和标记物标记的兔IgG的摩尔比为1:0.2~4；

所述含氨基或羧基基团物质标记的另一株RBP单克隆抗体通过以下步骤制得：

1）将RBP单克隆抗体溶于酸性缓冲液中，之后加入胃蛋白酶进行酶切反应；所述RBP单克隆抗体、胃蛋白酶与酸性缓冲液的质量比例为(0.5-1)：(0.5-1)：10000；所述酶切反应的温度为37℃-55℃；所述酶切反应的时间为0.5-2小时；

2）将步骤1）酶切后的混合溶液使用中性缓冲液透析过夜；

3）步骤2）得到的液体通过Protein A亲和纯化，DEAE纤维素阴离子交换层析法纯化获得RBP-F(ab’)₂；

4）将步骤3）得到的RBP-F(ab’)₂与HOOC-(CHCHO)_n-NH₂共价偶联，形成抗体中间体；所述HOOC-(CHCHO)_n-NH₂中n为12~16之间；所述RBP-F(ab’)₂与HOOC-(CHCHO)_n-NH₂的质量比例为（0.5-1）：1；

5）将步骤4）得到的抗体中间体与含氨基或羧基基团的物质共价结合，得到含氨基或羧基基团物质标记的RBP单克隆抗体；所述抗体中间体与含氨基或羧基基团的物质的质量比例为1：（5-10）。

2.如权利要求1所述的RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体；所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。

3.如权利要求2所述的RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述含氨基或羧基基团的物质为聚苯乙烯微球、量子点、磁性颗粒或胶体金；所述标记物为荧光微球、胶体金、胶体硒、彩色乳胶或磁性微球。

4.如权利要求1所述的RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述RBP免疫层析检测试剂盒还包括用于卡设试纸条的卡壳。

5.如权利要求1所述的RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，步骤1）中，所述酸性缓冲液的pH值在1~7之间，其选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、磷酸缓冲液、Tris-磷酸盐缓冲液和MES缓冲液中的一种。

6.如权利要求1所述的RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，步骤2）中，所述中性透析缓冲液的pH值在6~8之间，其为磷酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液或MES缓冲液。

7.如权利要求1所述的RBP免疫层析检测试剂盒，其特征在于，步骤5）中，所述含氨基或羧基基团的物质为聚苯乙烯微球、量子点、磁性颗粒或胶体金。