[发明专利]奈替米星核酸适配体及筛选和在奈替米星检测上的应用

说明书

本发明属于化学物质检测技术领域，涉及一种奈替米星核酸适配体及筛选和在奈替米星检测上的应用；具体公开了奈替米星核酸适配体、奈替米星核酸适配体的筛选方法、奈替米星检测用生物传感器及奈替米星检测方法。与现有技术相比，本发明检测方法具有检测限低、灵敏度高、特异性强、可视化快速定性分析、样品预处理简单、仪器要求低、成本低廉的优点。本发明提供的检测方法可用于检测水样中奈替米星的含量，检测的浓度范围是1.95‑200nmol/L。

技术领域

本发明属于化学物质检测技术领域，尤其是涉及一种奈替米星核酸适配体及筛选和在奈替米星检测上的应用。

背景技术

奈替米星为半合成的氨基糖苷类抗生素，化学组成为3-N-乙基西索米星，为白色或类白色的粉末或疏松块状物。抗菌作用与庆大霉素基本相似，其特点是对氨基糖苷乙酰转移酶AAC(3)稳定，对革兰阴性菌和部分革兰阳性菌具良好抗菌作用。因其不良反应较其他同类产品小，国外已应用于临床，国内也试制成功，用来预防、治疗和诊断疾病，同时有目的地调节动物生理机能、促进生长发育。主要用于临床及动物大肠杆菌、克雷白杆菌、变形杆菌等菌所致的呼吸道、消化道疾病的治疗，也用于防止仔猪等多种动物断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)引起的继发性感。并且此品在体内不代谢，其不规范的使用则可能导致肉类及奶制品中奈替米星残留过量的问题。同时奈替米星与动物组织的亲和力极强，残留时间长，有严重的耳毒性，肾毒性和神经毒性，吸入可有过敏反应、哮喘等变态反应。但此类药物治疗浓度和中毒浓度很接近，在临床应用中受到一定的限制`，在人体内及环境中聚集从而危害人体健康。

目前在环境中奈替米星残留分析使用的方法主要有微生物法、高效液相色谱法、高效毛细管电泳法、薄层色谱法及衍生化紫外分光光度法等。但其对于设备，专业知识，检测时间的要求较高，且并不适用于现场快速检测等缺点。这些方法多数样品处理复杂，分析仪器昂贵，一些方法检测灵敏度低。因此，目前的传统检测奈替米星的分析方法存在的局限性，难以实现对奈替米星的快速、实时、有效、简便的定性和定量的分析，因此，研发出一项造价便宜、实时快速、简便易行、高效准确、运行稳定的奈替米星检测技术是当今分析工作者迫切需要解决的问题。

发明内容

针对现有技术中奈替米星检测技术存在的缺陷，本发明提供一种奈替米星核酸适配体及筛选和在奈替米星检测上的应用，具体包括奈替米星酸适配体、奈替米星核酸适配体的筛选方法、奈替米星检测用生物传感器及奈替米星检测方法。

本发明中以核酸适配体为核心所构建的生物传感器，为今后在复杂的环境介质中定性定量分析奈替米星提供了便捷。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种奈替米星核酸适配体，所述适配体的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

SEQ ID NO.1：

5’-CTCCTCTGACTGTAACCACGCCCGTCAGTAGTGAGCTGCGTGCCAACATCACGCGGGCCGGCATAGGTAGTCCAGAAGCC-3’

本发明提供的奈替米星核酸适配体具有以下特性：

(1)高亲和力

所得到的适配体具有高亲和力：194.16nM；

(2)高特异性

在奈替米星相似物存在时，该适配体对奈替米星表现出良好的选择性。

本发明提供的奈替米星核酸适配体是基于磁珠SELEX法筛选得到的与奈替米星高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。

本发明还提供了一种奈替米星核酸适配体的筛选方法，包括以下步骤：

S1、奈替米星和羧基磁珠的偶联：