[发明专利]一种理化联合制备低致敏乳蛋白肽的方法

说明书

本发明公开了一种理化联合制备低致敏乳蛋白肽的方法，包括依次执行的以下步骤：步骤一：将乳蛋白与纯净水充分搅拌混匀，并通过超声波发生器和/或微波发生器处理5‑30mi n后得到乳蛋白液；步骤二：调整所述乳蛋白液pH至1‑3，加入胃蛋白酶，在36‑38℃条件下酶解1‑2h；步骤三：接着调整pH至6.5‑7.5，升温至47‑53℃后，加入木瓜蛋白酶酶解1‑4h；步骤四：最后纯化得到低致敏乳蛋白肽；所述低致敏乳蛋白肽的分子量小于等于10000Da。该方法模拟人体蛋白质消化过程，使得乳蛋白水解形成暴露特定抗原表位的多肽，然后使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶对多肽进行进一步的水解，尽可能多地消除乳蛋白致敏原特性，最后纯化筛选出特定分子量的对人体致敏性显著降低的乳蛋白肽。

技术领域

本发明涉及蛋白质加工技术领域，尤其涉及一种乳蛋白经物理处理结合定向酶解制备低致敏乳蛋白肽的方法。

背景技术

牛乳含3.3％-3.5％的蛋白质，其所含的乳蛋白几乎含有机体所有的必需氨基酸，是母乳最好的替代品，但乳蛋白中的酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳白蛋白等为过敏原，容易致使婴幼儿过敏。目前，牛乳过敏的发病率高达2％-7.5％，严重影响婴幼儿的生长发育，甚至威胁其生命。所以，乳蛋白除敏研究，对开发低致敏乳制品具有重要且深远的意义。目前，常用的乳制品加工技术如热处理、发酵、酶处理等，在加工过程中，都会改变乳蛋白的抗原性。此外，高压、糖基化、辐照、微波、高强度超声波等加工技术可以令蛋白内部结构展开或者氢键断裂、蛋白聚合、抗原表位掩盖或者暴露，因而也可以改变乳蛋白的抗原性。由于蛋白质通常具有四级结构，乳蛋白加工过程中，虽然能够将其表面的抗原掩盖或者除去，但也容易将其隐含的抗原暴露，引入新的致敏问题，故乳蛋白致敏问题一直都无法完全解决。

制备低致敏乳蛋白的技术在国外应用较早，产业化程度高。目前在中国市场上销售的低致敏婴幼儿配方乳粉几乎100％被发达国家公司控制，因此低致敏乳蛋白制备技术是中国食品产业，特别是关系到我国婴幼儿食品安全营养健康的一项卡脖子技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种乳蛋白物理处理与定向酶解相结合，制备低致敏乳蛋白肽的方法。

为解决上述技术问题，本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种理化联合制备低致敏乳蛋白肽的方法，包括依次执行的以下步骤：

步骤一：将乳蛋白与纯净水充分搅拌混匀，并通过超声波发生器和/或微波发生器处理5-30min后得到乳蛋白液，

步骤二：调整所述乳蛋白液pH至1-3，加入胃蛋白酶，在36-38℃条件下酶解1-2h；

步骤三：接着调整pH至6.5-7.5，升温至47-53℃后，加入木瓜蛋白酶酶解1-4h；

步骤四：最后纯化得到低致敏乳蛋白肽；

所述低致敏乳蛋白肽的分子量小于等于10000Da。

进一步地，在所述步骤三中，木瓜蛋白酶酶解完成后，继续将pH调节至7.5-8.5，加入胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶，然后在47-53℃条件下酶解1-2h。

进一步地，所述乳蛋白在所述乳蛋白溶液中的质量百分比浓度为10％-50％。

进一步地，所述胰蛋白酶的添加量为乳蛋白添加量的0.15-0.25％，所述胰凝乳蛋白酶的添加量为乳蛋白添加量的0.15％-0.25％。

进一步地，所述胃蛋白酶的添加量为乳蛋白添加量的0.25-0.35％；所述木瓜蛋白酶的添加量为乳蛋白添加量的0.25％-0.35％。

进一步地，所述超声波发生器的超声波频率为22-28KHz、功率400-600W；所述微波发生器的微波频率2300-2700MHz、功率200-400W。