[发明专利]一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法

权利要求书

1.一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

S1，获取表达融合蛋白Trx-Tat-hMsrA的枯草芽孢杆菌菌液；

S2，将所述枯草芽孢杆菌菌液重悬，加入RIPA裂解液，4℃以下温度下裂解，离心，弃上清后得沉淀；

S3，将所述沉淀用PBS漂洗，而后重悬于RIPA裂解液中，再次在4℃以下温度下裂解，得裂解混合液；

S4，将所述裂解混合液离心，弃上清，而后向蛋白沉淀中加入肠激酶酶切缓冲液酶切，得酶切后的混合溶液；

S5，将向所述混合溶液中加入复性溶液，复性，得复性混合物；

S6，将所述复性混合物先经纳滤除去杂质，而后经离子交换层析柱层析纯化，收集目标蛋白Tat-hMsrA，即得。

2.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S2和步骤S3中，4℃以下温度下裂解采用冰上裂解的方式完成。

3.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中，裂解时间控制在15min。

4.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S3中，PBS漂洗3～5次。

5.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S3中，裂解时间控制在15～20min。

6.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S2和S4中，所述离心操作温度控制在4℃，以12000rpm离心。

7.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S2和S4中，所述离心时间控制在15～20min。

8.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述复性所采用的复性溶液为含0.7～1.0mg/mL溶菌酶、1.0～2.0mg/L谷氨酰胺和0.1～0.5mol/L氯化锌的磷酸缓冲液。

9.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S6中，所述纳滤采用水凝胶-纳米颗粒滤膜，膜孔径为0.45μm。

10.根据权利要求1所述的一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，其特征在于，所述步骤S6中，所述离子交换柱层析采用交联葡聚糖凝胶柱，并依次采用0、0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，收集目标洗脱峰。