[发明专利]一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法

说明书

本发明公开了一种基因重组蛋白Tat‑hMsrA的高纯度纯化方法，包括以下步骤：S1，获取表达融合蛋白Trx‑Tat‑hMsrA的枯草芽孢杆菌菌液；S2，将所述枯草芽孢杆菌菌液重悬，RIPA裂解液裂解，离心，弃上清；S3，将沉淀用PBS漂洗，而后重悬于RIPA裂解液中，再次裂解；S4，将裂解混合液离心，弃上清，而后向蛋白沉淀中加入肠激酶酶切缓冲液酶切；S5，将混合溶液中复性；S6，将复性混合物先经纳滤除去杂质，而后经离子交换层析柱层析纯化，收集目标蛋白Tat‑hMsrA，即得。本发明操作步骤简单，获得的目标蛋白纯度高，活性高，而且收率也较高。

技术领域

本发明属于生物芯片制造领域，具体涉及一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法。

背景技术

蛋氨酸亚砜还原酶A是继超氧化物歧化酶之后的另一种引起广泛关注的抗氧化酶。与超氧化物歧化酶相比，蛋氨酸亚砜还原酶A不仅有在细胞内发挥清除氧化因素的作用，还可以对受损蛋白质进行有效修复。蛋氨酸亚砜还原酶A(MrsA)是一种很强的抗氧化酶。细胞穿透肽Tat安全无毒，可穿透细胞、血脑屏障，两者结合获得的人源性重组蛋白Tat-hMrsA可有望用于化妆品、保健品和药品中。

论文“蛋氨酸亚砜还原酶A对线粒体氧化应激损伤的保护作用及基因重组Tat-hMsrA中试工艺研究”中指出：使用基因工程的方法构建pet32a-Tat-hMsrA质粒，并从BL21(DE3)、gammi、rosseta、gold筛选最合适的大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)，然后进行蛋白的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，发现目标蛋白主要在包涵体表达，需要进行目标蛋白的变形和复性。但是从包涵体得到纯化目标蛋白，检测后无活性。

公开号为CN110283798A，发明名称为一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的纯化方法的中国发明专利公开了一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的纯化方法。该纯化方法能够有效确保纯化的蛋白具有活性。但是整体来说，其收率、纯度和蛋白活性均不甚理想。从其电泳图可以看出，纯化后的蛋白中明显含有杂质蛋白，而且纯化后的蛋白活性也不高。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的至少一种技术问题，提供一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，本发明操作步骤简单，获得的目标蛋白纯度高，活性高，而且收率也较高。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种基因重组蛋白Tat-hMsrA的高纯度纯化方法，包括以下步骤：

S1，获取表达融合蛋白Trx-Tat-hMsrA的枯草芽孢杆菌菌液；

S2，将所述枯草芽孢杆菌菌液重悬，加入RIPA裂解液，4℃以下温度下裂解，离心，弃上清后得沉淀；

S3，将所述沉淀用PBS漂洗，而后重悬于RIPA裂解液中，再次在4℃以下温度下裂解，得裂解混合液；

S4，将所述裂解混合液离心，弃上清，而后向蛋白沉淀中加入肠激酶酶切缓冲液酶切，得酶切后的混合溶液；

S5，将向所述混合溶液中加入复性溶液，复性，得复性混合物；

S6，将所述复性混合物先经纳滤除去杂质，而后经离子交换层析柱层析纯化，收集目标蛋白Tat-hMsrA，即得。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述步骤S2和步骤S3中，4℃以下温度下裂解采用冰上裂解的方式完成。

进一步，所述步骤S2中，裂解时间控制在15min。

进一步，所述步骤S3中，PBS漂洗3～5次。

进一步，所述步骤S3中，裂解时间控制在15～20min。

进一步，所述步骤S2和S4中，所述离心操作温度控制在4℃，以12000rpm离心。