[发明专利]一种简单高效的单胞藻分离纯化方法

权利要求书

1.一种简单高效的单胞藻分离纯化方法，包括如下步骤：

S1.培养液配制：在沙滤海水中加入硝酸钠、磷酸二氢钾、硅酸钠、柠檬酸铁，使其浓度分别为30×10^-6～50×10^-6mg/L、3×10^-6～5×10^-6mg/L、1×10^-6～2×10^-6mg/L、0.1×10^-6～0.2×10^-6mg/L，制成培养液；

S2.试管分装：将步骤S1所述培养液倒入洁净的玻璃试管中，所述培养液的体积为试管容积的1/4～1/3，试管置于金属试管架上；

S3.高温消毒：将步骤S2所述金属试管架和试管一起置于大铝锅内蒸煮消毒10～15min，冷却至室温24小时后即可使用；

S4.藻液稀释：在光学显微镜下，用血球计数板准确测定待分离纯化藻液的单胞藻细胞密度，用经煮沸消毒并冷却至室温的沙滤海水将藻液稀释至单胞藻细胞密度为20～30cells/mL；

S5.藻细胞分离：在晴天的上午8～10点，用经煮沸消毒的吸管吸取1～3滴稀释后的藻液并滴入步骤S3所述试管中，再盖上经高温蒸煮消毒的塑料试管帽；

S6.藻细胞培养：将步骤S5所述试管置于光照充足且没有阳光直射的地方静置培养1～5天，再震摇培养10天，所述震摇培养为每天上午8～10点、下午3～5点各震摇一次试管；

S7.镜检筛选：用经消毒的玻璃吸管或一次性无菌塑料吸管吸取单胞藻细胞生长旺盛的试管中的藻液，滴在洁净的载玻片上，在光学显微镜下镜检筛选出单胞藻细胞活力好且无杂藻细胞和敌害生物的试管；

S8.二次分离纯化：取步骤S7筛选后的试管，重复步骤S1～S6对藻液进行再次分离纯化；

S9.纯化藻种的选择：用经消毒的玻璃吸管或一次性无菌塑料吸管吸取单胞藻细胞生长旺盛的试管中的藻液，滴在洁净的载玻片上，在光学显微镜下镜检筛选，得到纯化的、无杂藻细胞和敌害生物的单胞藻。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述单胞藻为海水单胞藻。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述海水单胞藻包括金藻、扁藻、角毛藻、盐藻或小球藻。

4.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤S2所述试管的数量大于20支。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S2所述试管的数量大于50支。

6.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤S6所述震摇的时间为20～30s。

7.权利要求1～6任一所述方法在分离纯化海水单胞藻方面的应用。