[发明专利]一种轮状病毒滴定方法

权利要求书

1.一种对轮状病毒滴度进行测定的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(S1)将待测定的轮状病毒、可被所述轮状病毒感染的宿主细胞、和培养液置于检测孔中，形成培养体系，其中，在所述检测孔中宿主细胞的接种量为1.0×10⁶-1.5×10⁶个/cm²检测孔的底面积；

(S2)对所述培养体系在适合所述轮状病毒感染和复制的情况下，培养一段时间t1，从而获得受轮状病毒感染的贴壁宿主细胞，其中t1为12-22小时；

(S3)将所述受轮状病毒感染的贴壁宿主细胞进行固定处理，从而获得经固定的受轮状病毒感染的贴壁宿主细胞；

(S4)将所述经固定的受轮状病毒感染的贴壁宿主细胞与抗轮状病毒抗体进行接触，并持续一段时间t2，形成“轮状病毒-抗轮状病毒抗体”的复合物，其中，所述的抗轮状病毒抗体带有可检测标记，t2为0.5-2小时；和

(S5)基于所述“轮状病毒-抗轮状病毒抗体”的复合物，定量检测所述检测孔中的轮状病毒的数量，从而获得所述轮状病毒滴度的测定结果。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(S1)中，包括n个检测孔，n为≥3的正整数，较佳地n为6-96。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(S1)中，所述的检测孔包括一组或多组的系列检测孔，在一组系列检测孔中，各个检测孔除了轮状病毒的数量不同之外，其他条件相同(包括含有相同数量的宿主细胞、和相同成分和体积的培养液、相同的胰酶和胰酶浓度、相同的添加成分等)。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述的一组系列检测孔中，所述的轮状病毒的数量是经梯度稀释的，较佳地梯度稀释比为2-20。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稀释使用病毒稀释液，所述病毒稀释液包括以下组分：DMEM培养基、1-5μg/ml的胰蛋白酶、和100-400μg/ml的氯化钙。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞选自下组：Vero、MA-104、Caco-2或其组合。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养液为无血清培养液。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(S3)中,固定处理所用的固定剂选自下组：冰丙酮、甲醛、多聚甲醛、无水乙醇或其组合。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗轮状病毒抗体选自下组：抗VP6抗体、抗VP7抗体、抗VP1抗体、抗VP2抗体、抗VP4抗体或其组合。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测标记选自下组：FITC、辣根过氧化物酶(HRP)、DyLight 649或其组合。