[发明专利]定量检测牛乳酪蛋白过敏原的双抗体夹心ELISA检测方法

说明书

本发明涉及一种定量检测牛乳酪蛋白过敏原的双抗体夹心ELISA检测方法，将以牛乳过敏原酪蛋白作为免疫抗原分别免疫分别新西兰大白兔和BALB/c小鼠获得的兔多克隆抗体和鼠单克隆抗体，并分别对其性能进行鉴定评价，然后将两者进行夹心配对，从而建立定量检测牛乳酪蛋白过敏原的双抗体夹心ELISA检测方法。与现有技术相比，本发明具有较高的灵敏度、特异性、精密度和准确度，能够满足牛乳酪蛋白过敏原的检测要求。

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域，尤其是涉及一种定量检测牛乳酪蛋白过敏原的双抗体夹心ELISA检测方法。

背景技术

食物过敏(food allergy)是指对食物的不良反应，这种不良反应通常是由食物的某种特定成分所造成的。引起食物过敏的过敏原一般有三种形式：接触式过敏原，比如化妆品和油漆等；吸入式过敏原，比如真菌、花粉和尘螨等；摄入式过敏原，比如花生、鱼类、蛋类和奶类等。而在一般情况下，食物过敏是由牛奶、鱼、鸡蛋、花生、小麦、大豆、坚果类以及甲壳类，即摄入式过敏原造成的，并且在敏感人群中较易发生，同时具有根治困难、易反复发作、在体内潜伏周期长、临床症状多种多样等特点。根据一项流行病学调查，发达国家有超过8％的未成年人和2％的成年人经历过食物过敏，特别是在美国，大约5.3％的成年人和约6％的婴儿和儿童遭受食物过敏。在某些情况下会导致威胁生命的过敏反应。近年来，随着科学技术的发展，人们的生活环境和食物类型发生了巨大变化，遭受食物过敏性疾病的人数大量增加。目前，食物过敏性疾病已经成为了一个全球性、公众性的卫生问题。

牛乳具有高蛋白质含量和均衡营养，因此被广泛用于食品工业。牛乳过敏在临床上是指机体对牛奶蛋白的异常免疫反应，一般认为是一种或多种牛奶蛋白与IgE介导的反应之间的相互作用所致。不涉及免疫系统的反应则被定义为牛奶蛋白不耐受。牛乳主要蛋白质是80％的酪蛋白和20％乳清蛋白。酪蛋白分为α-酪蛋白，β-酪蛋白，κ-酪蛋白和γ-酪蛋白；乳清蛋白包括：α-乳白蛋白(α-LA)，β-乳球蛋白(β-LG)，牛血清白蛋白(BSA)，免疫球蛋白及含量甚微的乳铁蛋白等。研究表明牛乳中含有20多种可引起过敏反应的蛋白质，其中酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳白蛋白是最主要的过敏原物质。

酪蛋白是牛奶中的主要蛋白和奶酪的重要成分。牛奶中含有约3％的酪蛋白。它在pH 4.6时是等电的，在水中的溶解度仅为0.01％。它是两性的：pH低于4.6时，酪蛋白会形成适度溶解的盐，例如酪蛋白氯化物；pH4.6以上的酪蛋白与碱形成盐。酪蛋白酸钠和其他碱金属盐可无限溶解，而酪蛋白钙，其他碱土金属盐和重金属盐则几乎不溶。

在全球范围内，患有过敏性疾病的人群约占到全球总人口的25％，世界卫生组织(WHO)在20世纪末已将“食物过敏”列为21世纪重大卫生问题之一。我国对过敏原的法律法规也在逐步完善，旨在有效保护患有过敏性疾病人群的健康和安全。牛乳过敏属于食物过敏问题之一，目前尚无有效的牛乳主要过敏原诊断措施，而在食品及饮料的加工生产过程中，可能会产生交叉污染。因此，建立一个方便，快捷，灵敏，特异的牛乳主要过敏原检测方法，对于保障公众健康和安全意义重大，同时也为与国际接轨的过敏原标识制度提供了理论基础。

发明内容

酶联免疫分析是基于生物学演变而来的。酶联免疫吸附测定(Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)，也称为酶免疫测定，是一种生物化学程序，通过酶促反应产生的信号用于检测和定量溶液中特定物质的量。酶联免疫吸附测定(ELISA)通常用于检测抗原，也可以用于其他物质的检测，包括抗体、激素和药物等。ELISA具有灵敏度高、特异性强，且成本低等优点。