[发明专利]一种同时测定菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量的方法，属于中药活性成分含量测定技术领域。该方法包括：对照品溶液的制备，供试品溶液的制备和定量分析，采用HPLC法，以等度洗脱的方式，同时测定了菊苣中的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量，波峰分离良好，峰面积大小适宜，进样一针，20min左右出峰完毕；方法简便、快捷、准确、成本低、实用范围广，易于普及掌握。

技术领域

本发明涉及中药活性成分含量测定技术领域，尤其涉及一种同时测定菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量的方法。

背景技术

菊苣(Cichorium intybus L.)为菊科多年生草本植物。《中国药典》(2020版)中，菊苣作为维吾尔族习用药材，主要利用其干燥地上部分或根，具有清肝利胆，健胃消食，利尿消肿的功效，用于湿热黄疸，胃痛食少，水肿尿少。栽培菊苣有多种用途，叶子可以用作蔬菜和饲料，根可以用来生产菊粉和咖啡替代品。菊苣含有多种酚酸类化合物，如绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸等，具有清除自由基、抗脂质过氧化、保肝利胆、抗菌、抗病毒、增强免疫功能和抗炎作用。目前对菊苣还没有建立其质量控制方法。开发同时测定菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量的方法，为菊苣药用价值的评价和质量控制提供参考依据。

文献《毛菊苣不同部位中菊苣酸、绿原酸、单咖啡酰酒石酸的含量测定》中，对毛菊苣不同部位(根、茎、种子)中菊苣酸、绿原酸和单咖啡酰酒石酸3种成分进行了含量测定报道。文献《高效液相色谱法同时测定苣荬菜叶中绿原酸、木犀草苷和菊苣酸的含量》中，建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定苣荬菜叶中绿原酸、木犀草苷和菊苣酸的含量的分析方法。文献《HPLC法同时测定蒲公英中单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸、菊苣酸的含量》中，建立HPLC法同时测定蒲公英中4种有机酸类成分含量。文献《HPLC法测定蒲公英中菊苣酸、咖啡酸与绿原酸》中，建立同时测定蒲公英中菊苣酸、咖啡酸和绿原酸的HPLC方法。文献《HPLC同时测定苦碟子注射液中单咖啡酰基酒石酸、咖啡酸、绿原酸、阿魏酸、菊苣酸的含量》中，建立同时测定苦碟子注射液中5种有机酸类成分含量的HPLC分析方法。以上测定方法均为多种成分同时测定，检测时间较长(分别为50、50、34、55和40min)，洗脱方式为梯度洗脱，要求测定仪器必须带梯度洗脱装置，仪器成本提高，测定范围受到设备的限制。为提高检测效率，降低检测成本，本着检测指标增加，效率不减、成本不增加的原则，拟将菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸采用等度洗脱方式，同时测定。

发明内容

本发明的目的是通过提供一种同时测定菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量的方法，以实现同时对菊苣有效成分-绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸进行定量分析的目的，同时将测定分析时间缩减至20min左右，实现了定量指标翻倍，节省检测费用的有益效果。

为实现上述目的，本发明提供了一种同时测定菊苣中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸含量的方法，该方法采用等度洗脱的方法，包括以下步骤：

步骤一：对照品溶液的制备

分别取绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸对照品，加入溶剂，制成绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸对照品溶液，作为储备液，其他不同质量浓度的对照品溶液由储备液稀释得到；

步骤二：供试品溶液的制备

取菊苣粉末，加入溶剂，真空超声处理后过滤，取续滤液，过微孔滤膜，即得供试品溶液；

步骤三：定量分析

取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，进行测定分析。

优选的，步骤一中所述的溶剂为甲醇-0.5％磷酸溶液，其中甲醇与0.5％磷酸体积比为4:1-3:1；所制成绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和菊苣酸对照品溶液浓度为0.125-0.25mg/mL。

优选的，步骤二中所述的菊苣粉末提前过40-60目筛后取5-10g。