[发明专利]基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子的制备方法及应用，涉及生物医药技术领域。基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子的制备方法包括卤素中间体与叠氮化钠反应生成叠氮化物，再将叠氮化物与三苯基膦反应得到光亲和链接体，索拉非尼和氢氧化钠在无水乙醇中反应得到带有单羧酸的中间产物，光亲和链接体和带有单羧酸的中间产物在EDC·HCl的作用下发生缩合反应，生成基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子，其中，卤素中间体含有光活性基团双吖丙啶和碘元素。如此设置，索拉菲尼光亲和探针分子的制备方法简单，易于实现，且收率较高，双吖丙啶与苯基叠氮类、二苯甲酮类等光活性基团相比具有更高的光交联活性。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地说，涉及一种基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子的制备方法及应用。

背景技术

光亲和标记技术自提出到现在已取得了令人瞩目的发展，其结合现代分子生物学、细胞生物学、有机化学等多学科的优势，运用合成的光敏小分子化合物作为工具探针，经特定波长的光照射分解产生高活性的中间体，与其受体活性部位形成特异性的不可逆共价结合。它是分子水平上研究配体与受体相互作用的核心工具之一，对阐明配体与受体相互作用的机理以及药物先导物的发现有着巨大的推动作用。运用光亲和标记技术，大量的与疾病相关的靶点被发现、多种小分子与生物大分子作用的模式被确定，这些信息对合理设计药物具有非常重要的意义。

基于以上应用，通常都需要探针分子具有较大的摩尔吸光系数和较高的荧光量子产率，用于免疫分析时，与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性，这显然就需要光亲和探针分子具有特殊的化学结构。目前，采用光亲和标记技术经常被引入的光亲和基团包括苯基叠氮类、二苯甲酮类等，但它们的光交联活性并不高。因此，需要获得结构和性能优化，光交联活性更高的具有特异性的光亲和探针分子，成为本领域技术人员所要解决的重要技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子的制备方法及应用，以获得结构和性能优化，光交联活性更高的具有特异性的光亲和探针分子。本发明提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。

为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种基于卤素中间体的索拉非尼光亲和探针分子的制备方法，包括以下步骤：

1)将所述卤素中间体溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，向溶液中加入叠氮化钠，在70℃的条件下搅拌反应5h，加水淬灭，再通过乙酸乙酯萃取出有机相，经过饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，采用柱层析法分离得到叠氮化物，其结构式为：

2)将所述叠氮化物溶解在THF(四氢呋喃)和水的混合溶液中，THF和水的体积比为10∶1，向混合溶液中加入三苯基膦，室温下搅拌反应24h，向反应混合物中加入盐酸，并用乙醚萃取以除去副产物，然后向反应混合物中加入氢氧化钠，再通过乙醚萃取得到光亲和链接体，其结构式为：

3)将索拉非尼和氢氧化钠溶于无水乙醇中，在80℃的条件下密闭反应8h，调节反应后的溶液为弱酸性，加入二氯甲烷萃取出有机相，再经过饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥后去除溶剂二氯甲烷，采用柱层析法分离得到带有单羧酸的中间产物，其结构式为：

4)将所述带有单羧酸的中间产物溶于无水四氢呋喃中，然后加入EDC·HCl(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)和HOBt(1-羟基苯并三氮唑)，再逐滴加入DIPEA(二异丙基乙胺)，在冰浴条件下搅拌1h后加入所述光亲和链接体，室温条件下搅拌反应24h，得到索拉非尼光亲和探针分子，其结构式为：

其中，所述卤素中间体的结构式为：