[发明专利]CAS9-核酸复合物及其相关用途

权利要求书

1.一种重组核酸组合物，其包含：

包含编码细菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述细菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的变体编码的新杀手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的变体与SEQ ID NO:9编码相同的氨基酸，其中编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的序列或编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的载体被引入到真核细胞中；和

编码RNA的序列，其中该RNA包含

被配置成与所述真核细胞中表达的新杀手弗朗西斯菌Cas9蛋白结合的第一区段并且所述第一区段包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11，和

被配置成结合靶核酸序列的第二区段，

其中所述靶核酸序列是与癌基因相关的mRNA或微RNA，并且其中向所述真核细胞中引入所述重组核酸组合物导致与所述细胞中的所述基因组RNA或mRNA杂交或导致所述基因组RNA或mRNA在所述细胞中的降解。

2.一种重组载体，其包含：

包含编码细菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述细菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的变体编码的新杀手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的变体与SEQ ID NO:9编码相同的氨基酸，其中编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的序列或编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的载体被引入到真核细胞中；和

编码RNA的序列，其中该RNA包含

被配置成与所述真核细胞中表达的新杀手弗朗西斯菌Cas9蛋白结合的第一区段并且所述第一区段包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11，和

被配置成结合靶核酸序列的第二区段，

其中所述靶核酸序列是与癌基因相关的mRNA或微RNA，并且其中向所述真核细胞中引入所述重组核酸组合物导致与所述细胞中的所述基因组RNA或mRNA杂交或导致所述基因组RNA或mRNA在所述细胞中的降解。

3.权利要求1所述的重组核酸组合物或权利要求2所述的重组载体在制备治疗需要其的受试者中的癌症的药物中的用途。

4.一种重组载体，其包含

包含编码细菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述细菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的变体编码的新杀手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的变体与SEQ ID NO:9编码相同的氨基酸，其中编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的序列或编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的载体被引入到真核细胞中；和

靶向表达PD-1/PD-L1的mRNA的gRNA。

5.一种重组核酸构建体，其包含

包含编码细菌Cas9蛋白的Cas9基因的序列，其中所述细菌Cas9蛋白是由SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的变体编码的新杀手弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9，所述SEQID NO:9的变体与SEQ ID NO:9编码相同的氨基酸，其中编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的序列或编码所述新杀手弗朗西斯菌Cas9的载体被引入到植物细胞中；和

靶向RNA，其受在植物细胞中起作用的启动子序列的控制并且靶向基本上参与植物有害生物的生长和发育的序列。

6.如权利要求5所述的重组核酸构建体，其中所述靶向RNA靶向在所述植物有害生物的存活力、生长、发育、感染性中起重要作用的蛋白质的mRNA。

7.如权利要求5或6所述的重组核酸构建体在制备转基因植物中的用途，其中所述重组核酸构建体被引入到植物中以创建靶向植物有害生物的所述转基因植物。