[发明专利]CAS9-核酸复合物及其相关用途

说明书

本披露涉及Cas9‑核酸复合物及其相关用途。在某些实施例中，本披露设想了被遗传工程化以表达在此披露的Cas9‑核酸复合物的转基因植物和动物。在某些实施例中，本披露涉及使用被配置成表达在此披露的Cas9‑核酸复合物的载体治疗或预防疾病、病症、癌症、病毒感染、或其他病原性感染的方法。

本申请是申请日为2014年1月15日，申请号为“201480008880.5”，发明名称为“CAS9-核酸复合物及其相关用途”的申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年1月16日提交的美国临时申请号61/753,046和2013年11月18日提交的美国临时申请号61/905,368的优先权，两者都通过引用以其全文特此结合。

领域

本披露涉及Cas9-核酸复合物及其相关用途。在某些实施例中，本披露设想了被遗传工程化以表达在此披露的Cas9-核酸复合物的转基因植物和动物。在某些实施例中，本披露涉及使用被配置成表达在此披露的Cas9-核酸复合物的载体治疗或预防疾病、病症、癌症、病毒感染、或其他病原性感染的方法。

背景

CRISPR(成簇的规律间隔的短回文重复序列)-CAS(CRISPR-相关)基因提供针对外源核酸的防御。这些系统利用由重复序列侧翼间隔区组成的小CRISPR RNA(crRNA)的阵列来识别它们的靶标并且利用某些CAS蛋白来介导靶向降解。参见黑尔(Hale)等人，细胞(Cell)，2009，139，945-956；加西乌纳斯(Gasiunas)等人，美国国家科学院院刊(Proc NatlAcad Sci USA)，2012，109，E2579-2586；季聂克(Jinek)等人，科学(Science)，2012，337，816-821；以及迪杜森科(Datsenko)等人，自然通讯(Nat Commun)，2012，3，945。加尔诺(Garneau)等人，自然(Nature)，2010，468，67-71报道了CRISPR/Cas细菌免疫系统裂解噬菌体和质粒DNA。巴朗格(Barrangou)等人，科学(Science)，2007，315，1709-1712报道了CRISPR在原核生物中提供针对病毒的获得性抗性。Marraffmi(马拉弗米)和宗特海默尔(Sontheimer)，科学(Science)，2008，322，1843-1845报道了CRISPR干扰限制葡萄球菌中通过靶向DNA进行的水平基因转移。

霍瓦特(Horvath)等人，WO 2007025097，报道了一种或多种Cas基因或蛋白质用于调节细胞对靶核酸或其转录产物的抗性的用途。

黑尔等人报道了与Cas RAMP模块复合物一起作用来裂解RNA的CRISPR RNA的基本特征和合理设计。分子细胞(Molecular Cell)2012 45，292-302。

丘(Cho)等人报道了使用Cas9 RNA指导的内切核酸酶进行人细胞中靶向基因组工程化。自然生物技术(Nature Biotechnology)，2013，31，230-232。

马里(Mali)等人报道了通过Cas9进行的RNA指导的人基因组工程化。科学(Science)，2013，339:823-26。还参见季聂克等人，eLife，2013，2:e00471。

涅克拉索夫(Nekrasov)等人报道了使用Cas9 RNA指导的内切核酸酶进行模式植物本氏烟草的定向诱变。自然生物技术(Nat BiotechnoL)，2013，31(8):691-3。

在此引用的参考文献并非对现有技术的承认。

概述