[发明专利]一种用于立夏红桃树品种鉴定的SNP分子标记引物及其鉴定与应用方法有效
申请号: | 202110282499.X | 申请日: | 2021-03-16 |
公开(公告)号: | CN112831593B | 公开(公告)日: | 2022-08-30 |
发明(设计)人: | 周晖;张金云;盛玉;潘海发;谢庆梅;汪霄;陈红莉 | 申请(专利权)人: | 安徽省农业科学院园艺研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04 |
代理公司: | 合肥兴东知识产权代理有限公司 34148 | 代理人: | 姜玲燕 |
地址: | 230031 安*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 立夏 桃树 品种 鉴定 snp 分子 标记 引物 及其 应用 方法 | ||
1.一种用于立夏红桃树品种鉴定的SNP分子标记引物,其特征在于,包括四对引物,分别为AAAS1、AAAS2、AAAS3和AAAS4;
其中,所述AAAS1的正向引物序列如SEQ ID NO.1所示,AAAS1的反向引物序列如SEQ IDNO.2所示;所述AAAS2的正向引物序列如SEQ ID NO.3所示,AAAS2的反向引物序列如SEQ IDNO.4所示;所述AAAS3的正向引物序列如SEQ ID NO.5所示,AAAS3的反向引物序列如SEQ IDNO.6所示;所述AAAS4的正向引物序列如SEQ ID NO.7所示,AAAS4的反向引物序列如SEQ IDNO.8所示。
2.一种利用权利要求1所述的SNP分子标记引物进行立夏红桃树品种鉴定的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)使用CTAB法对“立夏红”、其母树“中油4号”以及待测桃品种分别提取DNA;
(2)以步骤(1)提取的各DNA产物为模板,以所述AAAS1、AAAS2、AAAS3、AAAS4为引物,分别进行PCR扩增;
(3)对步骤(2)中的各PCR产物进行电泳分离,检测PCR是否成功以及条带是否单一;
(4)对步骤(3)中检验合格的PCR产物进行Sanger测序,并根据每个PCR扩增产物中的特定位点的多态性进行统计;如果待测桃品种的PCR扩增产物的多态性与“立夏红”桃品种的PCR扩增产物的多态性一致,即判定该待测桃品种为“立夏红”桃品种;如果不一致,则表明待测桃品种并非“立夏红”桃品种;
其中,所述PCR扩增产物中的特定位点的多态性具体根据相应PCR产物目标位置的测序峰图进行观察判断。
3.根据权利要求2所述的利用SNP分子标记引物进行立夏红桃树品种鉴定的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,进行PCR扩增时,PCR酶选用Mix(green),循环内退火温度58℃,延伸时间30s,共35个循环。
4.根据权利要求2所述的利用SNP分子标记引物进行立夏红桃树品种鉴定的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,具体获得以下十二种PCR产物:“立夏红”桃品种AAAS1-PCR产物、“立夏红”桃品种AAAS2-PCR产物、“立夏红”桃品种AAAS3-PCR产物、“立夏红”桃品种AAAS4-PCR产物、“中油4号”桃品种AAAS1-PCR产物、“中油4号”桃品种AAAS2-PCR产物、“中油4号”桃品种AAAS3-PCR产物、“中油4号”桃品种AAAS4-PCR产物以及待测桃品种AAAS1-PCR产物、待测桃品种AAAS2-PCR产物、待测桃品种AAAS3-PCR产物、待测桃品种AAAS4-PCR产物。
5.根据权利要求2所述的利用SNP分子标记引物进行立夏红桃树品种鉴定的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,检验合格的PCR产物具体指条带清晰且单一PCR产物。
6.根据权利要求2所述的利用SNP分子标记引物进行立夏红桃树品种鉴定的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,进行Sanger测序时,测序引物使用AAAS1-AAAS4的正向引物。
7.一种如权利要求2所述的利用SNP分子标记引物进行立夏红桃树品种鉴定的方法在桃育种方面的应用。
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