[发明专利]一种覆膜酵母发酵滤液的制备工艺

说明书

一种覆膜酵母发酵滤液的制备工艺，包括两个步骤，首先，配制种子和发酵培养基；其次，在培养过程中采取静置微氧培养的方式，最后通过过滤的方式得到覆膜酵母发酵滤液。其特点在于发酵中采用微氧发酵，相较于有氧发酵更能刺激覆膜酵母产生丰富的次级代谢产物；同时静置培养不仅简化发酵工艺与操作流程，更营造了微氧的发酵环境，利于覆膜酵母的发酵，此方法适用于一般生物实验室，操作简单，成本低廉，产量较大。

技术领域

本发明属于发酵技术领域，尤其涉及一种覆膜酵母发酵物的制备工艺。

背景技术

皮肤对物理或化学刺激具有明显的敏感性，外源刺激（如紫外光照、化学物质等）引发炎症反应的同时，损害了皮肤屏障自我修复的能力，往往还诱发黑色素沉积，加速角质生成与皮肤老化。目前已有大量报道显示，某些益生菌不仅可以积极影响肠道菌群的组成，还可以在局部和全身水平调节免疫系统，从而改善免疫防御机制或下调免疫功能。

覆膜酵母是一种生香酵母，覆膜酵母相较于酿酒酵母来说，具有更丰富的次级代谢。在发酵过程中，覆膜酵母不仅能够消耗培养基中的营养物质，产生小分子有机酸、维生素、低聚糖等，还向发酵滤液中分泌蛋白酶、将大分子蛋白质分解为小分子氨基酸和多肽等，这些小分子物质，除了一小部分会被酵母自身吸收利用外，大部分将留在发酵滤液中。覆膜酵母发酵产物是一种蕴含丰富维生素、氨基酸、矿物质及有机酸的淡黄色透明液体，不仅能促进丝聚蛋白的表达，还可以防止丝氨酸蛋白酪氨酸介导的丝聚蛋白的减少。除此之外，覆膜酵母发酵滤液还可以增加表皮角质形成细胞中的caspase-14在3D模型中的表达，而caspase-14的表达参与受损皮肤屏障的修复。因此，覆膜酵母的发酵滤液，这种天然的混合成分能明显地改善肌肤表皮层的代谢过程，抑制自由基的产生，保护细胞免受损伤，提升肌肤抗衰老的能力，使肌肤维持透亮、柔嫩及细滑。这些功效在大量的体外实验中得到了证实，并广泛应用于护肤产品中。

目前已有报道中，专利（CN 112353714A与CN109355216A)中均采用了有氧发酵的条件，操作步骤过于繁琐，约8-10步，设备要求比较高，需要进行发酵罐发酵，对于一般实验室实施有困难，且生产成本较高。覆膜酵母为兼性厌氧型菌，在有氧条件下，可以大量的繁殖，快速增长，更利于菌体的生长与积累，但是不利于次级代谢产物的的产生与积累；在无氧条件或者微氧条件下，覆膜酵母为了抵抗外界的不良环境，会产生更为丰富的次级代谢产物，来保护自身抵御外界环境的伤害。因此，亟需开发一种适合实验室条件培养，工艺简单，且能产生丰富代谢产物的工艺。

发明内容

本发明目的在于提供一种覆膜酵母发酵滤液的制备工艺，简化工艺流程，适合实验室小规模发酵培养，同时能产生丰富的次级代谢产物。为解决上述技术问题，本发明的的具体技术方案如下：

一种覆膜酵母发酵滤液的制备工艺，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1）种子培养用YPD培养基

YPD培养基：将10 g酵母提取物，20 g的葡萄糖，20 g的蛋白胨，溶于1000 ml的去离子水中，115℃高压灭菌30 min，固体培养基添加2%的琼脂。

2）发酵表达用覆膜酵母发酵培养基

覆膜酵母发酵培养基分为第I部分与第II部分，分别进行配制及灭菌。第I部分与第II部分按1：1充分混合，即为所需培养基，混匀后pH为4-6。

步骤2：发酵表达

(1)菌种活化：

将覆膜酵母冻存菌接种于YPD培养基的无菌培养平皿中，在28℃条件下活化48-60h。

(2) 制备种子液：

从平板上挑取新鲜菌落，重悬至无菌水中，混匀后转接到100ml覆膜酵母发酵培养基中，摇床内28℃、200 rpm培养24 h。