[发明专利]一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法及应用

权利要求书

1.一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法，其特征在于：

包括以下步骤：

步骤一、从若干株人脐带中原代分离、扩增脐带间充质干细胞，传代培养至P5代；

步骤二、淋巴细胞亚群Th1亚群和Th17亚群流式分析：若干株P5代脐带间充质干细胞分别与新鲜分离的人外周血单个核细胞共培养，作为Th-MSC组；另取人外周血单个核细胞作为对照组，培养三天后，进行淋巴细胞亚群Th1亚群和Th17亚群流式分析；

淋巴细胞亚群调节性T细胞亚群流式分析：若干株P5代脐带间充质干细胞分别与新鲜分离的人外周血单个核细胞共培养，并加入人重组IL-2刺激剂，作为T-MSC组；另取人外周血单个核细胞加入人重组IL-2刺激剂，作为阳性对照组，培养条件下五天后，进行淋巴细胞亚群调节性T细胞亚群流式分析；

步骤三、将步骤二所获得的流式结果采用Flowjo软件分析，得到各Th-MSC组的Th1细胞比例、Th17细胞比例及各T-MSC组的T细胞比例；

根据细胞比例计算各组的Th1的抑制增殖比率、Th17的抑制增殖比率和Treg的促进增殖比率；

将若干株脐带间充质干细胞的Th1的抑制增殖比率、Th17的抑制增殖比率和Treg的促进增殖比率分别取平均值，获得相应的筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准。

2.根据权利要求1所述的筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法，其特征在于：

Th1的抑制增殖比率为[(对照组的Th1细胞比例-Th-MSC组的Th1细胞比例)/对照组的Th1细胞比例]％；

Th17的抑制增殖比率为[(对照组的Th17细胞比例-Th-MSC组的Th17细胞比例)/对照组的Th17细胞比例]％；

Treg的促进增殖比率为[(T-MSC组的T细胞比例-阳性对照组的T细胞比例)/阳性对照组的T细胞比例]％。

3.根据权利要求1所述的筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法，其特征在于：

步骤一中，人脐带间充质干细胞的分离及扩增方法为：无菌条件下采集人脐带，清洗脐带血迹、剔除脐带动静脉血管、剪碎、贴壁培养、消化、离心、重悬、接种后培养至80～90％融合，细胞消化传代扩增培养，第5代处于对数期的脐带间充质干细胞待用。

4.根据权利要求1所述的筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法，其特征在于：

步骤一中，若干株脐带间充质干细胞的株数为12株不同性别、不同年龄的脐带间充质干细胞。