[发明专利]一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法及应用

说明书

本发明公开了一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法及应用，构建方法包括以下步骤：步骤一、从若干株人脐带中原代分离、扩增脐带间充质干细胞，传代培养至P5代；步骤二、进行淋巴细胞亚群Th1亚群和Th17亚群流式分析和淋巴细胞亚群调节性T细胞亚群流式分析；步骤三、将步骤二所获得的流式结果采用Flowjo软件分析，计算各组的Th1的抑制增殖比率、Th17的抑制增殖比率和Treg的促进增殖比率；分别取平均值，获得相应的筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准。本发明为干细胞治疗自身免疫性疾病与免疫紊乱相关疾病基础研究和临床转化提供一种细胞选取标准，提高治疗效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种筛选干细胞的量化标准，尤其涉及一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法及应用。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)可以从一系列组织中分离培养，包括但不限于骨髓、脂肪、脐带、羊膜和胎盘等，具有自我更新和多向分化潜能，是一种能分化为成脂细胞、成骨细胞、成软骨细胞、肝细胞和神经细胞等多种间质组织细胞的多源细胞。因此间充质干细胞成为基础医学和临床学组织器官损伤修复及再生领域研究的热点。

其中，人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived MSCs，HUCMSCs)来源广泛、取材属于无侵入性操作以及细胞使用无伦理争议等优势，并且能够大量产业化扩增存储，同时人脐带间充质干细胞具有更强的增殖能力，免疫原性更低，可用于异体移植而受到广泛的关注。但是目前还存在一些问题，如不同供者来源的HUCMSCs移植到受者体内后移植治疗效果差异性大，同种细胞在分化潜能和免疫调节方面具有明显的个体异质性。具有异质性的MSCs在应用于某些疾病治疗时可以表现出功能变异。

发明内容

本发明提供一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法及应用，以克服目前缺乏有效检测MSCs免疫调节方法的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法，具有这样的特征：包括以下步骤：

步骤一、从若干株人脐带中原代分离、扩增脐带间充质干细胞，传代培养至P5代；

步骤二、淋巴细胞亚群Th1亚群和Th17亚群流式分析：若干株P5代脐带间充质干细胞分别与新鲜分离的人外周血单个核细胞共培养，作为Th-MSC组；另取人外周血单个核细胞作为对照组，培养三天后，进行淋巴细胞亚群Th1亚群和Th17亚群流式分析；

淋巴细胞亚群调节性T细胞亚群流式分析：若干株P5代脐带间充质干细胞分别与新鲜分离的人外周血单个核细胞共培养，并加入人重组IL-2刺激剂，作为T-MSC组；另取人外周血单个核细胞加入人重组IL-2刺激剂，作为阳性对照组，培养条件下五天后，进行淋巴细胞亚群调节性T细胞亚群流式分析；

步骤三、将步骤二所获得的流式结果采用Flowjo软件分析，得到各Th-MSC组的Th1细胞比例、Th17细胞比例及各T-MSC组的T细胞比例；

根据细胞比例计算各组的Th1的抑制增殖比率、Th17的抑制增殖比率和Treg的促进增殖比率；

将若干株脐带间充质干细胞的Th1的抑制增殖比率、Th17的抑制增殖比率和Treg的促进增殖比率分别取平均值，获得相应的筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准。

进一步，本发明提供一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准的构建方法，还可以具有这样的特征：

Th1的抑制增殖比率为[(对照组的Th1细胞比例-Th-MSC组的Th1细胞比例)/对照组的Th1细胞比例]％；