[发明专利]同步检测禽蛋中氟苯尼考、甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡及方法

说明书

本发明公开了一种同步检测禽蛋中氟苯尼考、甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡及方法；旨在提供一种样本前处理操作简单省时，无需吹干，检测方法灵敏度高，适用于现场即时检测，并且能够同步检测禽蛋中氟苯尼考和甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡及方法，其技术要点包括底板，所述的底板上从左至右依次衔接有吸水纸垫、反应膜、结合垫、样品垫，所述的反应膜上划有氟苯尼考检测线T1、甲氧苄啶检测线T2和质控C线三条线，所述的结合垫上包被有氟苯尼考检测微球、甲氧苄啶检测微球、羊抗鸡IgY多克隆抗体标记微球；属于生物检测技术领域。

技术领域

本发明公开了一种禽蛋检测方法，具体地说，本发明公开了一种同步检测禽蛋中氟苯尼考、甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡以及方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

氟苯尼考是一种新型氯霉素类广谱抗生素，在安全性和有效性上优势明显，在畜禽养殖业中大量使用。甲氧苄啶全称三甲氧苄氨嘧啶甲氧苄啶，属于广谱抗菌增效剂，本身杀菌能力不强，但与磺胺类药物和一些抗生素联合使用具有显著的增效作用，在畜禽养殖业中使用广泛。

但是，氟苯尼考和甲氧苄啶的大量使用，在畜禽产品中有较高的检出率，严重威胁对公众健康，因此食品安全国家标准对这两种抗生素制定了严格的检测限，蛋鸡产蛋期禁用。

目前，现有技术中氟苯尼考、甲氧苄啶的检测有色谱法、酶联法、免疫层析法等，这些方法有的严重依赖高端设备，有的对待测样品要求高，前处理复杂，或只能检测其中的一种，严重降低了工作效率。

发明内容

针对上述问题，本发明的第一个目的是提供一种检测灵敏度高，操作简单省时，无需吹干，灵敏度高，适用于现场即时检测，并且能够同步检测禽蛋中氟苯尼考和甲氧苄啶含量的免疫荧光层检测卡。

本发明的另一个目的是提供一种同步检测禽蛋中氟苯尼考和甲氧苄啶含量的方法，该方法操作简单，能有效消除干扰项，提高检测的灵敏度，适用任何场所的禽蛋检测。

为了达到上述目的，本发明提供的第一个技术方案是这样的：

一种同步检测禽蛋中氟苯尼考、甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡，包括底板，所述的底板上从左至右依次衔接有吸水纸垫、反应膜、结合垫、样品垫，所述的反应膜上划有氟苯尼考检测线T1、甲氧苄啶检测线T2和质控C线三条线，所述的结合垫上包被有氟苯尼考检测微球、甲氧苄啶检测微球、羊抗鸡IgY多克隆抗体标记微球；

所述的氟苯尼考检测微球是通过连结有聚乙二醇长链加长臂（-dPEG24-）的长链生物素化氟苯尼考单克隆抗体与链霉亲和素荧光微球经生物素与链霉亲和素结合制成的；

所述的甲氧苄啶检测微球是通过连结有聚乙二醇长链加长臂（-dPEG24-）的长链生物素化甲氧苄啶单克隆抗体与链霉亲和素荧光微球经生物素与链霉亲和素结合制成的。

进一步的，上述的一种同步检测禽蛋中氟苯尼考、甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡，所述的反应膜通过下述步骤制得的：

（1）用含3%蔗糖糖的pH 7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将鸡IgY稀释到0.1mg/mL，作为质控C线工作液；

（2）用含3%蔗糖糖的pH 7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将氟苯尼考偶联抗原稀释到0.2mg/mL，作为氟苯尼考检测线工作液；

（3）用含3%蔗糖糖的pH 7.4的0.01M的磷酸盐缓冲液将甲氧苄啶偶联抗原稀释到0.2mg/mL，作为甲氧苄啶检测线工作液；

（4）用喷金划膜仪器在硝酸纤维膜上划氟苯尼考检测线T1、甲氧苄啶检测线T2和质控C线三条线，相邻两线间距5mm，划线浓度均为1μl/cm；划完后置在45℃干燥箱中干燥48小时。

进一步的，上述的一种同步检测禽蛋中氟苯尼考、甲氧苄啶含量的免疫荧光层析检测卡，所述的样品垫通过下述步骤制得的：