[发明专利]双鸟苷酸环化酶抑制剂在抑制革兰氏阴性菌药物中的应用及抑菌药物

说明书

本发明涉及一种双鸟苷酸环化酶抑制剂在抑制革兰氏阴性菌药物中的应用及抑菌药物，所述双鸟苷酸环化酶抑制剂包括依布硒或依布硒类似物中的一种，所述双鸟苷酸环化酶抑制剂在不影响细菌的生长曲线的浓度下，降低抗生素对细菌的最小抑菌浓度。与现有技术相比，本发明利用双鸟苷酸环化酶抑制剂与抗生素的协同作用，大大提高了抗生素抑制革兰氏阴性耐药菌的能力，提供了一种新的杀菌抑菌方法，与单纯依靠抗生素抑制革兰氏阴性耐药菌的结果相比，本发明具有更好的抑菌效果，并可发展其类似物来杀菌抑菌，具有大规模推广的前景。

技术领域

本发明涉及杀菌抑菌药物领域，尤其是涉及一种双鸟苷酸环化酶抑制剂在抑制革兰氏阴性菌药物中的应用及抑菌药物。

背景技术

细菌耐药性严重危害世界公众健康、造成巨大经济损失。抗生素的过度使用和滥用引发了细菌耐药性的产生。一些常见的革兰氏阴性耐药菌，如产超广谱β内酰胺酶大肠杆菌、多重耐药铜绿假单胞菌等，不加以严格的控制和管理，将会成为最具威胁的耐药菌。据悉，在近50年来，没有新种类的抗生素被认可用于抑制革兰氏阴性细菌。抗生素的发展已经追赶不上细菌的进化和耐药性的产生。因此新的杀菌、抑菌方法至关重要。

目前越来越多的抑菌新方法是基于细菌本身代谢情况，通过改变细菌代谢水平达到杀菌目的。如外源添加碳源化合物扰乱中心碳代谢、抑制合成细胞壁的脂多糖组装相关的功能蛋白等可以辅助抗生素，提高杀菌的效果。一些基于无机材料的杀菌方法如纳米银，虽然具有很好的杀菌效果和高的持久性，但是材料本身的价格和加工要求相对较高。此外纳米银会对神经、皮肤等产生毒性，不适用于体内治疗。天然的抗菌剂如壳聚糖等虽然安全无害，但是加工困难，使用寿命短。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种双鸟苷酸环化酶抑制剂在抑制革兰氏阴性菌药物中的应用及抑菌药物，利用小分子抑制剂来抑制细菌耐药性形成相关的酶活性，从而辅助提高抗生素的杀菌能力。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明的第一个目的是保护一种双鸟苷酸环化酶抑制剂在抑制革兰氏阴性菌药物中的应用。

进一步地，所述双鸟苷酸环化酶抑制剂包括依布硒或依布硒类似物中的一种。依布硒可以通过在硒和半胱氨酸残基中的硫醇之间形成共价键来抑制蛋白质活性，还可以通过其剩余的化学支架改变蛋白质活性。因此满足具有合适支架结构、且可与双鸟苷酸环化酶的半胱氨酸残基进行共价修饰的依布硒类似物均可能作为抑制剂。

进一步地，所述双鸟苷酸环化酶抑制剂在不影响细菌的生长曲线的浓度下，降低抗生素对细菌的最小抑菌浓度。

进一步地，所述不影响细菌生长曲线的双鸟苷酸环化酶抑制剂浓度由以下步骤获得：

S1：配制抗生素和双鸟苷酸环化酶抑制剂储备液；

S2：将双鸟苷酸环化酶抑制剂释成一系列浓度；

S3：在多孔板中对细菌进行培养，将S2中得到的双鸟苷酸环化酶抑制剂依次加入有菌液的孔中，作为一系列实验组，同时设置对照组，对细菌进行孵育；

S4：使用酶标仪在间隔时间对S3中的所有实验组和对照组进行数据采集，绘制不同浓度双鸟苷酸环化酶抑制剂下的细菌生长曲线，获得对细菌生长无影响的双鸟苷酸环化酶抑制剂浓度。

进一步地，所述双鸟苷酸环化酶抑制剂阻碍革兰氏阴性菌的生物膜的形成，以此降低抗生素对细菌的最小抑菌浓度，所述最小抑菌浓度的获取过程为：

S5：通过二倍稀释法将S1中得到的抗生素溶液稀释成一系列的浓度，用于抗生素敏感性测试；

S6：在多孔板中对细菌进行培养，将S5中得到的抗生素依次加入有菌液的孔中，并依次加入S4中所得浓度的双鸟苷酸环化酶抑制剂作为一系列实验组，同时设置对照组，对细菌进行孵育；