[发明专利]一种快速检测环境中新冠病毒的引物、方法和应用

说明书

本发明公开了一种快速检测环境中新冠病毒的引物、方法和应用。所述检测方法是基于PCR和DNA荧光染料进行检测，结果可靠。本发明通过结合便携光谱仪、便携PCR仪、移动电源以及智能手机等现有设备，实现了新冠病毒的现场快速检测，突破了现有检测技术对人员和场所的限制，且设备便携，操作简单。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种一种快速检测环境中新冠病 毒的引物、方法和应用。

背景技术

为防范新冠病毒，除需对人进行核酸检测外，对有可能受到新冠病毒污染的 物品、环境等，也有必要开展相应的检测。

当前，世界卫生组织及国家推荐的新冠病毒检测方法主要是荧光定量PCR 和基因测序，由于基因测序的速度比较慢，价格也较昂贵，适合从事研究但不适 合作为筛查手段。目前上市的即时检测(POCT)试剂盒多是基于基因扩增进行 检测的，和实验室内的传统PCR检测相比，一体化现场快速检测虽然便携、操 作简单，但如果过于强调其“快速”的特性，其灵敏度可能会受影响。此外，基于 试纸条的抗原快速检测试剂和抗体快速检测试剂都属于免疫检测，免疫检测比核 酸检测要快，通常只需15-30分钟即可出结果，但其灵敏度不如核酸检测。

目前平衡的最好的仍是核酸检测试剂盒。从过往的重大疫情来看，无论是西 非埃博拉病毒、甲流还是中东呼吸综合征(MERS)，实时荧光PCR仍是国家首 推的检测方式。但实时荧光PCR的议价高，不适合偏远地区或社区部门进行初 筛。因此，开发新型冠状病毒的现场快速检测方法，突破现有检测技术对人员/ 场所的限制，缩短检测用时，提升便捷程度，推动诊断前移下移，实现环境样品 的快速诊断和密切接触人群的现场筛查是控制疫情的当务之急。

中国专利CN 111560472A公开了一种用于检测新冠病毒SARS-CoV-2的探 针和引物、试剂盒、检测方法及应用，其开发了一种全程闭管RNA指数扩增法 (WEPEAR法)，结合逆转录-重组酶聚合酶扩增技术(RT-ERA)进行，但其完 成检测所需仪器较多，无法进行现场可视化快速检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种快速 检测环境中新冠病毒的方法及其应用。

本发明第一个目的是提供一种新冠病毒检测引物。

本发明第二个目的是提供一种新冠病毒检测方法。

本发明第三个目的是提供一种快速检测环境中新冠病毒的产品。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先提供了一种新冠病毒检测引物，包括上游引物和下游引物，其序 列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了所述引物在快速检测环境中新冠病毒或在制备新冠病毒快 速检测产品中的应用。

一种快速检测环境中新冠病毒的方法，其包含以下步骤：

S1.对环境中的待测物表面进行采样；

S2.提取病毒RNA并进行反转录得cDNA；

S3.以步骤S2所得cDNA为模板，用权利要求1所述引物进行PCR扩增；

S4.在步骤S3所得产物中加入聚集诱导发光材料，并在紫外灯下观察是否出 现荧光。

优选地，所述聚集诱导发光材料为TTAPE。

TTAPE为1,1,2,2-四[4-(2-三乙基氨甲氧基)苯基]乙烯四溴化物，其结构式 如式(I)所示：

优选地，步骤S3中，PCR的扩增体系为：2X Master Mix 12.5μL，上下游 引物各0.2μL，DNA模板1μL，加无菌水补充至25μL。