[发明专利]RAA荧光法检测单增李斯特菌的引物、探针和试剂盒在审
| 申请号： | 202110288296.1 | 申请日： | 2021-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN112852986A | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 崔荣飞 | 申请（专利权）人： | 石家庄市畜产品和兽药饲料质量检测中心（石家庄市畜产品质量研究所） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京圣州专利代理事务所(普通合伙) 11818 | 代理人： | 王振佳 |
| 地址： | 050041 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | raa 荧光 检测 李斯特 引物 探针 试剂盒 | ||
1.一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的引物，其特征在于：引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物序列为CTAGCTCATTTCACATCGTCCATCTATTTGC，所述下游引物序列为CAAGTGGTAAGTTCCGGTCATCAATTACCGTTC。
2.一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的探针，其特征在于：所述探针序列为5’端序列/荧光报告基团/A/THF/淬灭基团/3’端序列，
其中：所述5’端的核苷酸序列为：CGTCCATCTATTTGCCWGGTAACGCRAGAAAT；
所述3’端的核苷酸序列为：TAATGTTTACGCYAAAG；
所述THF为1个碱基位置；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中的任一种；
所述淬灭基团选自TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL中的任一种。
3.根据权利要求2所述的一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的探针，其特征在于：所述探针的核苷酸序列为CGTCCATCTATTTGCCWGGTAACGCRAGAAATATTAATGTTTACGCYAAAG。
4.一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括RAA基础荧光通用反应试剂、反应缓冲液、阴性质控品、阳性质控品、引物和探针；
引物为权利要求1中所述的RAA荧光法检测单增李斯特菌的引物，探针为权利要求2中所述的RAA荧光法检测单增李斯特菌的探针。
5.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于：所述引物中上游引物和下游引物的浓度均为0.05-0.1mmol/L。
6.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于：所述探针的浓度为0.02-0.05mmol/L。
7.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液包括以下含量组分：浓度为500mmol/L的Tris-HCl缓冲液(pH值7.4)、浓度为240mmol/L的MgAc和质量分数为10％的PEG10000。
8.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于：所述阳性质控品中含有单增李斯特菌的基因组DNA；所述单增李斯特菌的基因组DNA的浓度为1×106Copies/ul。
9.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于：所述阴性质控品为ddH2O或纯化水。
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