[发明专利]一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202110289678.6 | 申请日： | 2021-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN112795674A | 公开（公告）日： | 2021-05-14 |
| 发明（设计）人： | 黄新新;何宇平;古淑青;郭德华 | 申请（专利权）人： | 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 沈涛 |
| 地址： | 200135 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 raa 技术 检测 克罗诺 杆菌 引物 探针 组合 试剂盒 方法 | ||
1.一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合，其特征在于：包括一引物对和一探针，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列为SEQ ID NO.1：CGCGTTCGGTGGTTACCAGGTTAACCCGTACG，所述下游引物的序列为SEQ ID NO.2：TACCATGCCGCCCAGACGGGTGTATACGTCCAG，所述探针的序列为SEQ ID NO.5：GCTGGGCCGCATGCCGTATAAAGGCGACAC(FAM-dT)(THF) (BHQ-dT)AAACGGCGCTTTCAA-C3 Spacer。
2.一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物探针组合。
3.根据权利要求2所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的试剂盒，其特征在于：还包括缓冲液、乙酸镁以及纯化水。
4.一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：具体步骤如下：提取待测样本的基因组DNA；以待测样本的基因组DNA为模板，采用如权利要求3所述的试剂盒进行实时荧光RAA扩增；根据实时荧光RAA扩增曲线分析待测样本是否含有克罗诺杆菌。
5.根据权利要求4所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所述RAA扩增的反应体系中，所述上游引物、下游引物和探针的终浓度分别为100-400 nmol/L。
6.根据权利要求5所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所述上游引物、下游引物和探针的终浓度分别为400nmol/L。
7.根据权利要求5所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所述RAA扩增的反应体系为：缓冲液25μL，上游引物和下游引物各2μL，探针2μL，乙酸镁2.5μL，DNA模板和纯化水共16.5μL；所述上游引物、下游引物以及探针的浓度分别为10μM。
8.根据权利要求4所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：所述RAA扩增的反应条件为：温度37-42℃，时间28-33min。
9.根据权利要求8所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法，其特征在于：
所述RAA扩增的反应条件为：温度39℃，时间30min。
10.权利要求4-9所述的基于RAA技术检测克罗诺杆菌的方法在检测食品中克罗诺杆菌的应用。
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