[发明专利]一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合、试剂盒及方法

说明书

本发明属于微生物检测技术领域，具体公开了一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合、试剂盒及方法。所述引物探针组合包括一引物对和一探针，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO.5所示。采用本发明试剂盒和方法进行克罗诺杆菌的检测，特异性好、灵敏度高、准确性高、操作简单、成本低，既能进行实验室检测又能进行现场快速检测，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合、试剂盒及方法。

背景技术

克罗诺杆菌属（Cronobacter spp.）是一种重要的食源性病原体，现已从婴幼儿配方食品、肉制品、水果蔬菜、谷物等食品内分离出该菌。克罗诺杆菌属与新生儿脑膜炎病例、坏死性小肠结肠炎、败血症、血痢和脑脓肿相关。对于婴儿，尤其是体重低于2500g的早产儿具有很高的感染风险。有研究表明，克罗诺杆菌能在婴儿奶粉中长期存活，因此对克罗诺杆菌的及时检出是预防其危害发生的重要手段。

传统的克罗诺杆菌检测方法为微生物培养法，我国也制定了克罗诺杆菌检验国家标准（GB4789.40-2016《食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验》），规范了克罗诺杆菌的培养法检测。但是该传统检测方法检测时间长，且检测步骤繁琐，费时费力，因此近年来众多研究者对克罗诺杆菌的快检技术进行了探索研究。

相较于微生物培养法，分子生物学方法可以有效缩短检测时间，目前针对克罗诺杆菌的分子检测技术主要包括普通PCR、实时荧光PCR、LAMP、基因芯片等，但是这些方法也存在缺点：普通PCR操作繁琐，需要电泳；荧光PCR设备较大，只能在实验室使用，没法进行现场检测；LAMP等温扩增速度快但特异性不高，容易污染；基因芯片的检测灵敏度往往不够高，成本也不菲。

因此，目前还缺少一种既能进行实验室检测又能进行现场快速检测的灵敏、简便、快速和低成本的克罗诺杆菌检测方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合、试剂盒及方法。

作为本发明的第一方面，本发明提供一种基于RAA技术检测克罗诺杆菌的引物探针组合，包括一引物对和一探针，所述引物对包括上游引物和下游引物，

所述上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO.5所示：

SEQ ID NO.1：CGCGTTCGGTGGTTACCAGGTTAACCCGTACG；

SEQ ID NO.2：TACCATGCCGCCCAGACGGGTGTATACGTCCAG；

SEQ ID NO.5：GCTGGGCCGCATGCCGTATAAAGGCGACAC(FAM-dT)(THF) (BHQ-dT)AAACGGCGCTTTCAA-C3 Spacer；

其中：FAM-dT表示携带荧光基团的胸腺嘧啶核苷酸，THF表示四氢呋喃连接子，BHQ-dT表示携带荧光淬灭基团的胸腺嘧啶核苷酸, C3 Spacer表示间臂。