[发明专利]一种纯化猪轮状病毒的方法及其应用

说明书

本发明涉及兽用疫苗技术领域，尤其涉及一种纯化猪轮状病毒的方法及其应用。所述方法包括：取片状载体培养的猪轮状病毒液作为待纯化病毒液；对所述待纯化病毒液进行膜包浓缩和离子交换层析：首先使用100～300KD膜包将病毒液浓缩，经过3次洗滤，将病毒液浓缩20倍后再利用离子交换层析技术将病毒捕获洗脱，达到精细分离纯化的目的。本发明通过特定的膜包浓缩技术结合离子交换层析，较大程度地增加了病毒的回收率，降低了杂蛋白的含量，提高了猪轮状病毒的浓度，可以应用至猪轮状病毒疫苗中。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，尤其涉及一种纯化猪轮状病毒的方法及其应用。

背景技术

猪轮状病毒病是由轮状病毒感染引起的仔猪腹泻性疾病。主要症状为厌食、呕吐、下痢，中猪和大猪为隐性感染。病原体除猪轮状病毒外，人、鸡、牛、马等的幼龄动物分离的轮状病毒也可感染仔猪，引起不同程度的症状。轮状病毒对外界环境的抵抗力较强，在18～20摄氏度的粪便和乳汁中，能存活7～9个月。

目前，猪轮状病毒广泛分布于各地养猪场，其高病死率给各地的养猪业带来巨大经济损失。但是针对猪的轮状病毒尚无特效药治疗，控制轮状病毒感染最有效的方法是接种疫苗，但是用于制备疫苗的原料病毒，通常在细胞中培养，收获的培养液除含有病毒外，还含有宿主蛋白核酸及培养过程中引入杂质，如果杂质含量过多，可能会对疫苗安全性及有效性产生不利影响。

膜包浓缩技术是一种改革传统工艺实现高效纯化浓缩的技术。具体原理为料液以一定的流速在膜的上表面循环，小于膜孔径的物质可以透过膜到透过端，而大于膜孔径的物质会被膜截留，从而实现目标物质的浓缩以及不同物质的分级分离。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种纯化猪轮状病毒的方法及其应用。本发明通过特定的膜包浓缩技术结合离子交换层析，较大程度地增加了病毒的回收率，降低了杂蛋白的含量，提高了目标产物的浓度。

第一方面，本发明提供一种纯化猪轮状病毒的方法，包括：

取片状载体培养的猪轮状病毒液作为待纯化病毒液；

对所述待纯化病毒液进行膜包浓缩和离子交换层析；

所述膜包浓缩包括如下流程：

使用100～300KD膜包将所述待纯化病毒液浓缩至起始体积的1/5～1/10，后补加缓冲液并浓缩至所述起始体积的1/10～1/20，再次补加缓冲液浓缩至所述起始体积的1/20～1/40。

进一步地，所述100～300KD膜包在使用前经过如下预处理流程：

使用碱溶液对所述100～300KD膜包进行循环灭菌处理，再通过无菌注射水清洗所述100～300KD膜包至pH为6.8～7.2。

进一步地，在所述膜包浓缩后，使用所述起始体积1/20～1/40的缓冲液冲洗膜包，收集洗膜液。

进一步地，所述缓冲液为0.01～0.02mol/L的PB溶液。

进一步地，所述离子交换层析的介质为Q Focurose 6FF。

进一步地，所述离子交换层析的洗脱液包括含0.2～0.3mol/L的NaCl的PBS，所述PBS的浓度为0.01～0.02mol/L。

进一步地，所述离子交换层析过程中，pH保持在8.0～8.1，和/或，病毒浓缩液上样的线性流速为50～60cm/h，和/或，压力小于2.5bar。

本发明进一步提供所述方法在制备用于免疫猪轮状病毒的药物中的应用。

进一步地，所述药物为疫苗。

本发明具备如下有益效果：