[发明专利]5-氨基乙酰丙酸合成酶突变体及其宿主细胞和应用

权利要求书

1.一种ALA合成酶，其特征在于：

(a) 所述ALA合成酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸残基为赖氨酸，或者第365位的氨基酸残基为赖氨酸并且第40位的氨基酸残基为甘氨酸；

或

(b) 所述ALA合成酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸残基为赖氨酸，并且第29位的氨基酸残基为精氨酸或第44位为脯氨酸或第75位为丙氨酸。

2.权利要求1所述的ALA合成酶的编码核酸分子。

3.包含权利要求1所述的ALA合成酶编码核酸分子的表达载体。

4.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有权利要求1所述的ALA合成酶，

所述宿主细胞是大肠杆菌(Escherichia coli)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。

5.如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是大肠杆菌或谷氨酸棒状杆菌。

6.权利要求1所述的ALA合成酶、或权利要求2所述的编码核酸分子、或权利要求3所述的表达载体、或权利要求4或5所述的宿主细胞在生产ALA中的应用。

7. 一种制备ALA的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 培养权利要求4或5所述的宿主细胞，使之产生ALA；和

b. 任选从培养液中分离步骤a产生的ALA。

8. 一种制备ALA的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 利用权利要求1所述的ALA合成酶，催化合成ALA；和

b. 任选从以上反应体系中分离ALA。

9.权利要求1所述的ALA合成酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a. 得到权利要求1所述的ALA合成酶的编码序列；

b. 将a得到的编码序列直接转染合适的宿主细胞或经载体引入合适的宿主细胞；

c. 培养b得到的宿主细胞；

d. 从步骤c得到的培养体系中分离所述宿主细胞产生的ALA合成酶。

10. 改造ALA合成酶以便提高其活性的方法，所述方法包括以下步骤：

a. 将待改造的ALA合成酶的氨基酸序列与SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列作比对；和

b. 改造所述待改造ALA合成酶的编码序列，使得编码的氨基酸序列中对应于SEQ IDNO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸残基为赖氨酸，或者第365位的氨基酸残基为赖氨酸并且第40位的氨基酸残基为甘氨酸；

或

对应于SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的第365位的氨基酸残基为赖氨酸，并且第29位的氨基酸残基为精氨酸或第44位为脯氨酸或第75位为丙氨酸；

c. 将b得到的编码序列直接转染合适的宿主细胞或经载体引入合适的宿主细胞；

d. 培养c得到的宿主细胞；和

e. 从步骤d得到的培养体系中分离所述宿主细胞产生的ALA合成酶。