[发明专利]针对有转录活性的SARS-CoV-2的检测试剂盒和使用方法

权利要求书

1.一种针对有转录活性5UTR-E基因的crRNA，其特征在于：是由crRNA1、crRNA2或crRNA3中的一种以上组成，其序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的crRNA，其特征在于：是由crRNA1、crRNA2和crRNA3等比例混合而成。

3.一种针对有转录活性5UTR-E基因的等温扩增引物，其特征在于：是由5’UTR-E RPA-F1和5’UTR-E RPA-R4组成，其序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:14所示。

4.一种针对有转录活性的SARS-CoV-2的检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的crRNA和权利要求3所述的等温扩增引物。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：还包括ssDNA报告系统和/或Cas12a核酸酶。

6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于：所述的ssDNA报告系统包括用于荧光检测的ssDNA FQ reporter：6FAM-TTATT-BHQ1(5’→3’)。

7.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：还包括RNase抑制剂和缓冲液。

8.权利要求4-7任一项所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)使用RNA提取试剂盒提取待测样本的总RNA；再使用权利要求3所述的等温扩增引物扩增获得供检测的核酸；

(2)配制如下表所示的反应体系，于35～40℃反应15min～2h；

(3)利用酶标仪分析，或在荧光灯下肉眼判读核酸检测结果；

若检测体系中存在特定的转录活性SARS-CoV-2亚基因组核酸序列，使用酶标仪会检测到荧光读数或经485nm激发光激发产生肉眼可见的绿色荧光；

待检测样品中不存在特定的转录活性SARS-CoV-2亚基因组核酸序列时，不会有荧光读数或激发的绿色荧光。

9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于：步骤(1)所述的扩增，是在35～40℃反应15min以上。

10.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于：步骤(1)所述的扩增，反应体系为50μL，其包括nμL总RNA，(18.5-n)μL ddH₂O、2μL 5UTR-RPA-F、2μL 5UTR-RPA-R、2.5μL乙酸镁和25μL反应缓冲液。