[发明专利]一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法

权利要求书

1.一种用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）合成类沸石咪唑酯骨架材料-8；

（2）将类沸石咪唑酯骨架材料-8分散于甲醇水溶液中，调节pH，再加入十六烷基三甲基溴化铵，搅拌反应后，加入正硅酸乙酯，搅拌反应，离心，洗涤，真空干燥得到介孔二氧化硅包覆的沸石咪唑酯骨架材料-8；

（3）将介孔二氧化硅包覆的沸石咪唑酯骨架材料-8置于管式炉中煅烧得到介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料；

（4）将介孔二氧化硅包覆的氮掺杂碳纳米材料利用氢氟酸溶液进行刻蚀得到氮掺杂碳纳米材料；

（5）将合成得到的氮掺杂碳纳米材料作为基底，将其分散于溶剂中，超声分散后在剧烈搅拌下加入氯金酸，通过化学试剂或物理法进行还原，反应后过滤、洗涤，真空干燥得到纳米复合模拟酶；

（6）将合成得到的纳米复合模拟酶分散到溶剂中并加入3-巯基丙酸，震荡反应后，离心，洗涤，得到的产物重新分散，并取一定量的分散液向其中加入2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化羧基，反应后离心，得到的产品分散后，再加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液和乙酰胆碱酯酶制备得到整合酶。

2.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述合成类沸石咪唑酯骨架材料-8的方法包括以下步骤：

（a）取摩尔比为1:2~1:10的六水合硝酸锌和2-甲基咪唑，分散在甲醇中搅拌反应1~24h，搅拌速度为搅拌的速度为500~1500 rpm；

（b）反应后离心分离，并通过甲醇洗涤3~5次，其中离心分离的转速为5000~13000 rpm；

（c）洗涤后的产物在60~120 ℃下真空干燥24~48 h，得到类沸石咪唑酯骨架材料-8。

3.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数是10 %~50 %；调节pH范围是10~12；加入的十六烷基三甲基溴化铵的质量是0.2~0.3g，加入十六烷基三甲基溴化铵搅拌的速度为500~1000rpm，加入十六烷基三甲基溴化铵后搅拌反应的时间是10~40 min；加入的正硅酸乙酯的体积为1~2 mL，搅拌反应的时间是2~6 h，搅拌的速度是500~1000 rpm；离心时用的溶剂是超纯水或甲醇，洗涤次数为3~6次；真空干燥的温度为50~80 ℃，干燥的时间是24~48 h。

4.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述煅烧过程中保持氮气氛围，煅烧的温度为700~1000 ℃，煅烧时间为1~5 h，升温速率为1~10 ℃/min。

5.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述氢氟酸溶液的浓度是2~8 %、体积为30~50 mL，刻蚀的时间是0.5~4 h。

6.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述分散溶剂为水或乙醇，溶剂的体积是10~80 mL，超声分散的时间是10~60 min，所述氯金酸的原液是四水合氯金酸，氯金酸的浓度是20 mg/mL，加入的氯金酸的体积为105~840 μL。

7.根据权利要求1所述的用于检测农药小分子的整合酶的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述化学试剂包括硼氢化钠或单宁酸，向加入氯金酸后的反应溶液中加入1~5 mL的1.5 mg/mL的硼氢化钠溶液或10~30 mL的浓度为0.006 mol/L的单宁酸溶液，所述搅拌反应的时间是1~4 h，所述洗涤次数为3~6次；所述真空干燥的温度是50~80 ℃，干燥的时间是24~48 h。