[发明专利]一种禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法

权利要求书

1.一种禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，样品禾谷镰刀菌进行前处理后制备样品溶液，样品溶液经色谱柱进行洗脱分离，利用UPLC-MS/MS的MRM模式采集数据，电喷雾离子源，负离子扫描方式下监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，通过标准曲线线性回归方程分别对T6P和Tre进行定量；

所述色谱柱为Phenomenexluna ®NH2 100 Å，100×2mm，3μm，色谱柱时，UPLC优化条件如下：

流动相A：万分之一氨水；

流动相B：乙腈；

梯度：70%A等度洗脱；

流速：0.4mL/min；

或，

所述色谱柱为waters Acquity UPLC HSS T3 Column，100×3mm，1.7μm色谱柱时，UPLC优化条件如下：

流动相A：5mM乙酸铵，包含万分之一氨水；

流动相B：乙腈；

梯度：0-3min 99%A、3-5min 10%A、5-8min 99%；

流速：0.25mL/min；

待测样品禾谷镰刀菌的前处理方法如下：

将待测禾谷镰刀菌置于绿豆汤液体培养基中，在28℃，140rpm条件下培养7天，过滤去除菌丝后，离心浓缩成为1×10⁵ 个/mL孢子液备用；将孢子液接种于马铃薯液体培养基中，每瓶接种1mL，28℃，140rpm震荡培养7d后，过滤取菌丝，采用去离子水清洗3次后，烘干，－20℃储存待测；

准确称取菌丝样品0.04g于15mL离心管中，加入4mL去离子水，浸泡1h后，采用高速匀浆机匀浆，加入4mL甲醇后，－80℃冷冻，在超声波清洗机超声解冻破壁30min，离心，取上清液，待测。

2.根据权利要求1所述的禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于质谱条件具体为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；检测方式：MRM多反应监测气帘气压力Curtain Gas:40Kpa；电喷雾电压Ionspray Voltage：－4500 Kpa；离子源温度Temperature：450℃；雾化气压力Ion Source Gas1：65Kpa；加热辅助气压力Ion SourceGas2：65Kpa；驻留时间：40 ms。

3.根据权利要求1或2所述的禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：当检测对象为T6P时，离子对为：421.2/241.1,421.2/139.1；DP为-110，CE为-35，-35。

4.根据权利要求1或2所述的禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：当检测对象为Tre时，离子对为：341.0/178.8, 341.0/118.9；DP为-95，CE为-19，-25。

5.根据权利要求1所述的禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：T6P标准谱图的获取方法具体如下：

称取T6P标准品于容量瓶种，利用体积分数为60%的乙腈溶解并定容，然后利用60%的乙腈逐级稀释配置成多个浓度梯度的标准工作溶液，将不同浓度的标准工作溶液进行UPLC-MS/MS分析，并制作标准曲线和谱图。

6.根据权利要求1所述的禾谷镰刀菌中T6P和Tre的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：Tre标准谱图的获取方法具体如下：

称取Tre标准品于容量瓶种，利用体积分数为60%的乙腈溶解并定容，然后利用60%的乙腈逐级稀释配置成多个浓度梯度的标准工作溶液，将不同浓度的标准工作溶液进行UPLC-MS/MS分析，并制作标准曲线和谱图。