[发明专利]一种基于保护剂的精子冷冻保存方法

说明书

本发明公开了一种基于保护剂的精子冷冻保存方法，包括以下步骤：a)使用稀少精子冷冻保护剂稀释精液样本，所述的稀少精子冷冻保护剂与精液的体积比为1∶(1‑2)；b)将精液‑稀少精子冷冻保护剂混合物放置在室温下作用最少5分钟；c)将精液‑稀少精子冷冻保护剂混合物装入保存容器中扣在支架上，然后在液氮面上熏蒸10分钟；d)将载有保存容器的支架转移到‑196℃液氮存储罐中保存。其中，d)中所述的液氮存储罐包括罐体、第一真空层、支撑脚、冷冻仓、安装口、冷冻架、安全扣件、升降装置、夹持装置和两轴坐标定位装置；设置了冷冻架，可以保证有序的保存更多的冷冻试管；设置了两轴坐标定位装置，可以实现编码存放和定位快速提取，提高了效率。

技术领域

本发明属于辅助繁殖技术领域，尤其是涉及一种基于保护剂的精子冷冻保存方法。

背景技术

精液冷冻是一种辅助繁殖技术，常常用于养殖家畜中的人工授精或者人体的不孕不育辅助生殖；在精液冷冻的过程中，需要将人工收集的精液进行病毒抗性检查和精子活力抽样检查，之后加入保护剂，并封存在冷冻试管中，在液氮的超低温环境中进行冷冻保存；在需要时，将精液从液氮罐中取出进行解冻处理，即可进行受精使用；在现有的液氮冷冻装置中，液氮装置的结构较为简单，通常是将由金属制成的多层抽屉通过挂钩挂在液氮罐的罐口，而金属抽屉和存放其中的冷冻试管淹没在液氮中，之后通过压盖将液氮罐封闭；此种液氮冷冻方式存在较大的弊端，首先，由于挂钩挂在罐口，导致压盖在对液氮罐进行瓶口封闭时，密闭性较差，液氮会从罐口大量挥发，造成浪费，同时，由于液氮的泄漏，液氮罐口周围的环境温度大大降低，空气中的水分会遇冷凝结，在液氮罐口形成厚厚的冰霜层，需要专门的工作人员进行定期的清理工作，投入的人力成本相应增加；其次，冷冻试管在金属抽屉中的摆放完全依靠人力进行整理，没有专门的定位机构，在进行几次存放之后，金属抽屉中的冷冻试管往往会失去排序，混乱的摆放在抽屉中，在进行解冻提取时需要工作人员花费较长的时间进行识别找寻，从而降低了效率，浪费了时间，造成液氮的挥发，同时，无法及时找到对应的冷冻试管，使得整个冷冻抽屉在外界环境中暴露的时间变长，大大增加了冷冻精液标本被感染的风险，同时，由于冷冻抽屉的集中存放，进一步增加了标本件病毒、细菌的传染可能性，使得冷冻精子的存活率降低，繁殖率下降。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种基于保护剂的精子冷冻保存方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种基于保护剂的精子冷冻保存方法，包括以下步骤:

a)使用稀少精子冷冻保护剂稀释精液样本，所述的稀少精子冷冻保护剂与精液的体积比为1∶(1-2)；

b)将精液-稀少精子冷冻保护剂混合物放置在室温下作用最少5分钟；

c)将精液-稀少精子冷冻保护剂混合物装入保存试管中在液氮面上熏蒸10分钟；

d)将载有保存试管的支架转移到-196℃液氮存储罐中保存；

其中，d)中所述的液氮存储罐包括罐体、设于所述罐体壁的第一真空层、固定连接于所述管体底部的支撑脚、设于所述罐体内部的冷冻仓、设于所述罐体上部的安装口、滑动连接于所述安装口的冷冻架、设于所述冷冻架的安全扣件、设于所述冷冻架上的升降装置、设于所述冷冻架上的夹持装置和设于所述冷冻架上的两轴坐标定位装置；