[发明专利]一种NK细胞活性快速检测方法及系统

权利要求书

1.一种NK细胞活性快速检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S100，对免疫细胞样本进行染色；

S200，在免疫细胞样本中的任意一个位置滴入靶细胞液,记放入靶细胞液的中心位置为L点；

S300，每间隔时间T采集免疫细胞样本的显微图像或CCD图像作为细胞活性图像；其中，T的取值范围为[10,300]秒；

S400，对细胞活性图像进行高斯滤波，进行灰度化得到灰度图像，并对灰度图像进行边缘提取得到边缘图像；

S500，判断边缘图像中边缘线构成的连通区域的数量是否小于等于1，如果小于等于1则跳转到步骤S300进行下一次监测，如果大于1则跳转到步骤S600；

S600，搜索边缘图像的各个连通区域，搜索各个连通区域的边缘线上的各个像素点中距离L点的欧氏距离或马氏距离最近的点，以欧氏距离或马氏距离最小的点作为第一参考点，将第一参考点所在的边缘线构成的连通区域作为第一连通区域，记第一连通区域的面积为M；

S700，搜索边缘图像的各个连通区域，搜索面积大于M并且与第一连通区域存在交集的各个连通区域的边缘线上的各个像素点中距离L点的欧氏距离或马氏距离最近的点，以为欧氏距离或马氏距离最小的点作为第二参考点，将第二参考点所在的边缘线构成的连通区域作为第二连通区域；

S800，如果M大于设定的靶细胞液面积阈值，则跳转到步骤S300进行下一次监测；当M小于或等于设定的靶细胞液面积阈值时，通过第一连通区域和第二连通区域判断NK细胞活性的强弱的检测结果。

2.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性快速检测方法，其特征在于，在S100中，对免疫细胞样本进行染色的方法为：利用荧光染料对血液样本进行染色，并加入红细胞裂解液或者溶血剂进行溶血去处红细胞得到免疫细胞样本，所述荧光染料为4',6-二脒基-2-苯基吲哚、异硫氰酸荧光素、增强型荧光蛋白、7-氨基放线菌素D中任意一种。

3.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性快速检测方法，其特征在于，在S200中，所述靶细胞液中的靶细胞通过瞬时转染使靶细胞特异性表达绿色荧光蛋白；靶细胞液的滴入量为免疫细胞样本量的20分之一，所述靶细胞液中的靶细胞包括：K-562细胞、海拉细胞或肿瘤细胞、病毒感染细胞、非自身组织细胞、寄生虫中任意一种。

4.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性快速检测方法，其特征在于，在S800中，当M小于或等于设定的靶细胞液面积阈值时，通过第一连通区域和第二连通区域判断NK细胞活性的强弱的方法为：当第一连通区域的面积大于或等于第二连通区域的0.2～0.5倍，则检测结果为NK细胞活性低；当第一连通区域的面积小于第二连通区域的0.2～0.5倍，并且当第一连通区域包含于第二连通区域，即第一连通区域在第二连通区域的内部，则检测结果为NK细胞活性强。

5.根据权利要求1所述的一种NK细胞活性快速检测方法，其特征在于，在S800中，当M小于或等于设定的靶细胞液面积阈值时，当M小于或等于设定的靶细胞液面积阈值时，通过第一连通区域和第二连通区域判断NK细胞活性的强弱的方法还可以为：

利用流式细胞仪检测与显微图像中第一连通区域在免疫细胞样本中对应的靶细胞液，得到靶细胞存活与死亡的比例，

当比例小于3.9％时，检测结果为NK细胞活性强；

当比例大于等于3.9％且小于等于19.5％时，检测结果为NK细胞活性一般；

当比例大于19.5％时，检测结果为NK细胞活性弱。

6.一种NK细胞活性快速检测系统，其特征在于，所述系统包括：存储器、处理器以及存储在所述存储器中并可在所述处理器上运行的计算机程序，所述处理器执行所述计算机程序运行在以下系统的单元中：

细胞样本染色单元，用于对免疫细胞样本进行染色；

靶细胞滴入单元，用于在免疫细胞样本中的任意一个位置滴入靶细胞液,记放入靶细胞液的中心位置为L点；

活性图像采集单元，用于每间隔时间T采集一次免疫细胞样本的显微图像或CCD图像作为细胞活性图像；其中，T的取值范围为[10,300]秒；

边缘图像提取单元，用于对细胞活性图像进行高斯滤波，进行灰度化得到灰度图像，并对灰度图像进行边缘提取得到边缘图像；

连通区域判断单元，用于判断边缘图像中边缘线构成的连通区域的数量是否小于等于1，如果小于等于1则跳转到活性图像采集单元进行下一次监测，如果大于1则跳转到靶细胞区定位单元；

靶细胞区定位单元，用于搜索边缘图像的各个连通区域，搜索各个连通区域的边缘线上的各个像素点中距离L点的欧氏距离或马氏距离最近的点，以欧氏距离或马氏距离最小的点作为第一参考点，将第一参考点所在的边缘线构成的连通区域作为第一连通区域，记第一连通区域的面积为M；

NK细胞区定位单元，用于搜索边缘图像的各个连通区域，搜索面积大于M并且与第一连通区域存在交集的各个连通区域的边缘线上的各个像素点中距离L点的欧氏距离或马氏距离最近的点，以为欧氏距离或马氏距离最小的点作为第二参考点，将第二参考点所在的边缘线构成的连通区域作为第二连通区域；

检测结果生成单元，用于如果M大于设定的靶细胞液面积阈值，则跳转到活性图像采集单元进行下一次监测；当M小于或等于设定的靶细胞液面积阈值时，通过第一连通区域和第二连通区域判断NK细胞活性的强弱的检测结果。