[发明专利]一种用于鲟鱼种质鉴定的SNP引物和检测方法有效
| 申请号： | 202110301543.7 | 申请日： | 2021-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN112831573B | 公开（公告）日： | 2023-05-26 |
| 发明（设计）人： | 孔杰;李丽;王金乐;李小义;赵凤 | 申请（专利权）人： | 贵州省水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 550025 贵州省贵阳市花溪区省水产*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 鲟鱼 种质 鉴定 snp 引物 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于鲟鱼种质鉴定的SNP引物，其特征在于：由2对外围引物，7条中间引物组成，引物的核苷酸序列如下：
2.使用权利要求1所述的一种用于鲟鱼种质鉴定的SNP引物对鲟鱼种质鉴定的方法，其特征在于:包括以下步骤：
步骤一：外围引物扩增目的片段条件：PCR反应总体积为50μL，其中：模板DNA 100ng，I-5TM High-Fidelity Master Mix MCLAB 25μL，外围引物10μmol/L各2μL，补充无菌双蒸水至50μL；
步骤二：外围引物扩增目的片段程序：98℃2min；98℃10s，57℃10s，72℃10s，30个循环；72℃延伸5min；
步骤三：PCR产物用SAP酶消化去除PCR体系中剩余的dNTP和引物，反应条件：37℃1h，75℃15min，4℃∞；
步骤四：中间引物扩增SNP位点，单链延伸：
反应体系：5μL
SAP消化后Template 2μL
ABI SnapShot multiplex Mix 2μL
中间引物 1μL；
步骤五：反应条件：
96℃10s
50℃5s
60℃30s
4℃∞。
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