[发明专利]一种CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型的构建方法和用途

说明书

本发明涉及动物基因工程和基因遗传修饰技术领域，特别涉及一种CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型的构建方法和用途。一种CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型的构建方法，所述构建方法包括：将肿瘤细胞引入人源化小鼠中，所述人源化小鼠的CRBN基因包括I391V突变。本发明构建的CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型不仅可用于免疫调节药物药效的评估，对药物开发的临床效果也具有重要的指导意义。同时也是IMiDs类药物安全性评价的理想小鼠肿瘤细胞模型，可对IMiDs类药物的毒理学进行临床前体评价，填补了市场空白。

技术领域

本发明涉及动物基因工程和基因遗传修饰技术领域，特别涉及一种CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型的构建方法和用途。

背景技术

Immunomodulatory drugs(IMiDs)是指沙利杜安(Thalidomide)及其结构和功能类似物，是免疫系统的有效调节剂。从上个世纪60年代至今，Thalidomide及其类似物，先后被发现可以用来治疗麻风病，多发性骨髓瘤，骨髓异常增生等疾病。这类药物治疗这些疾病的机制大致上可以分为两类，一类是同通过免疫调节作用，另一类就是通过靶向CRL4-CRBNE3泛素连接酶来促进一些对肿瘤存活至关重要的蛋白的泛素化降解，如IKZF1，IKZF3和CK1α。

目前IMiDs类药物的免疫调节作用包括抗炎症作用，增强NK细胞活性和共刺激T细胞。目前这些免疫调节作用的靶点尚不明确，已有的文章提出IMiDs类药物共刺激T细胞的作用是通过靶向CRL4-CRBN E3泛素连接酶来介导IKZF1/3蛋白的泛素化降解，进而促进IL2的分泌，共刺激T细胞。在基于T细胞免疫的免疫疗法高速发展的今天，即使已经有一些文献报道了IMiDs可以通过非直接杀伤肿瘤细胞的方式在一些实体瘤中发挥治疗效果，并可能它的免疫调节作用有关，IMiDs类药物对于T细胞的共刺激作用并没有得到很好的开发应用。阻碍IMiDs类药物作为免疫治疗药物或者佐剂的最大障碍在于缺少合适的临床前动物模型。IMiDs类药物的直接作用靶点CRBN蛋白在人和鼠之间存在着一些差别，尤其是在这类药物的结合位点附近。这些差别使得小鼠的CRBN无法响应IMiDs类药物的处理。

有文献报道将小鼠CRBN基因中第391位的异亮氨酸突变为缬氨酸可以使得小鼠的CRBN对IMiDs类药物产生响应。所以构建合适的人源化小鼠有利于促进已有的IMiDs类药物，包括Lenalidomide和Pomalidomide作为免疫治疗药物或者佐剂的临床前研究。与此同时，新的IMiDs类药物正在源源不断产生，因此构建好的人源化动物肿瘤细胞模型将会促进这些老药和新药的临床前研究。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明提供一种CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型的构建方法和用途，用于解决现有技术中存在的问题。

为了实现上述目的及其他相关目的，本发明是通过包括采用如下技术方案获得。

本发明的目的之一在于提供一种CRBN基因人源化动物肿瘤细胞模型的构建方法，所述构建方法包括：

将肿瘤细胞引入人源化小鼠中，所述人源化小鼠的CRBN基因包括I391V突变。

优选地，所述肿瘤细胞选自结肠癌细胞、黑色素瘤细胞、肝癌细胞、肺癌细胞和淋巴癌细胞中的一种。

优选地，所述肿瘤细胞来源于小鼠。

优选地，所述肿瘤细胞经皮下注射或尾静脉注射被引入人源化小鼠中。

优选地，所述肿瘤细胞为过表达抗原的肿瘤细胞，优选的，所述抗原选自OVA、NY-ESO-1、HER2中的一种或几种。

更优选地，所述过表达抗原的肿瘤细胞的构建方法包括：在所述肿瘤细胞的基因组中整合用于编码所述抗原的多核苷酸，优选的，通过病毒包装将所述抗原的编码基因包装到慢病毒中，侵染所述肿瘤细胞。