[发明专利]ASFV-p54蛋白特异性的纳米抗体-HRP融合蛋白及制备方法、应用

权利要求书

1.一种抗ASFV-p54蛋白的纳米抗体p54-Nb83，其特征在于：所述纳米抗体p54-Nb83的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

2.一种编码权利要求1所述纳米抗体氨基酸序列的核苷酸分子，其特征在于：所述核苷酸分子的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。

3.一种融合蛋白p54-Nb83-HRP，其特征在于：所述融合蛋白p54-Nb83-HRP由权利要求1所述的纳米抗体p54-Nb83与HRP串联而成。

4.一种根据权利要求3所述的融合蛋白p54-Nb83-HRP的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：利用串联PCR将p54-Nb83基因序列与HRP基因序列串联，克隆入真核表达质粒中，构建重组表达质粒，将所述重组表达质粒转染宿主细胞后表达p54-Nb83-HRP融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述真核表达质粒为pCAGGS；所述重组表达质粒为pCAGGS-p54-Nb83-HRP；所述宿主细胞为HEK293T细胞。

6.根据权利要求3所述的融合蛋白p54-Nb83-HRP在制备检测抗ASFV抗体的产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测包括以下步骤：

(1)ELISA板上包被ASFV p54蛋白，得到已包被ASFV p54蛋白的ELISA板；(2)将待检猪血清样品与步骤(1)包被蛋白孵育；(3)将融合蛋白p54-Nb83-HRP加至上述ELISA板上，孵育后加入显色液避光反应，加入3M硫酸终止反应后观察颜色，若待检样品中含有p54蛋白特异性抗体，则反应孔呈浅黄色或无色；若待检样品中无p54蛋白特异性抗体，则反应孔黄色较深。