[发明专利]ASFV-p54蛋白特异性的纳米抗体-HRP融合蛋白及制备方法、应用

说明书

本发明公开一种ASFV‑p54蛋白特异性的纳米抗体‑HRP融合蛋白及制备方法、应用，涉及生物技术领域；本发明提供一种ASFV‑p54蛋白特异性的纳米抗体‑HRP融合蛋白由纳米抗体p54‑Nb83与HRP串联而成，所述纳米抗体p54‑Nb83的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；本发明还利用所述纳米抗体‑HRP融合蛋白作为灵敏探针，建立检测ASFV血清抗体的阻断ELISA，相比传统间接ELISA检测方法，所述阻断ELISA具有操作简单，成本低，灵敏度高，特异性强，稳定性好的优势，具有广阔的市场化及临床应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及ASFV-p54蛋白特异性的纳米抗体-HRP融合蛋白及制备方法、应用。

背景技术

非洲猪瘟(African Swine Fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine FeverVirus，ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高度接触性的烈性传染病，致死率几乎100％，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告传染病。该病于1921年首先在肯尼亚报道，2018年8月3日，中国正式报道了该病的存在，随后ASF在我国大面积暴发导致养猪业损失惨重，进而引起猪存栏数锐减、肉价飙升，对我国养猪业健康发展、猪肉稳定供应和经济稳定发展等带来严峻挑战。鉴于当前无有效商品化疫苗可用，ASF的早期快速准确诊断对该病的防控具有非常重要的意义。

ASFV为非洲猪瘟相关病毒科非洲猪瘟病毒属，是目前已知的唯一虫媒DNA病毒。ASFV病毒粒子直径约260-300nm，是有囊膜的二十面体线性双链DNA(Double-strandedDNA,dsDNA)病毒，属于核质大DNA病毒(Nucleo-cytoplasmic large DNA viruses,NCLDV)超家族。ASFV基因组长170-194kb，总共含有151-167个ORFs，编码包括p54、p72、p30在内的54种结构蛋白和100多种非结构蛋白。p54蛋白存在于病毒粒子内层囊膜，是ASFV重要的结构蛋白，由E183L基因编码。p54蛋白抗原性较好，动物实验表明，弱毒株攻毒后7-10天即可检测到p54抗体，因此其通常用与疫苗研制和血清学检测。

目前，间接ELISA是OIE指定的最常用的ASFV血清抗体检测方法。此外，国内外研究人员针对ASFV建立了多种核酸检测方法，主要有PCR、荧光定量PCR、数字PCR、恒温RPA-LFD以及纳米孔测序等，但这些方法存在检测时间长、操作繁琐、设备要求高、成本高、易污染等问题。目前，我国针对ASFV血清抗体的检测主要采用OIE推荐的间接ELISA检测方法，虽然该方法灵敏度较高且特异性较强，但是费时费力，生产成本高，周期长，严重阻碍了临床应用。建立新型的ASFV血清抗体ELISA检测方法是目前本领域亟待解决的问题。