[发明专利]抑瘤素M联合脂多糖诱导的人鼻粘膜上皮细胞炎症模型、制法以及应用

说明书

本发明公开了一种抑瘤素M联合脂多糖诱导的人鼻粘膜上皮细胞炎症模型、制法以及应用。所述模型通过包含下述步骤的方法制备：将人鼻粘膜上皮细胞接种在培养基中进行培养得到贴壁生长的人鼻粘膜上皮细胞；更换所述培养基，并加入抑瘤素M培养所述贴壁生长的人鼻粘膜上皮细胞，然后再加入脂多糖进行培养得到所述模型。本发明首次使用OSM联合LPS作为刺激物处理人鼻粘膜上皮细胞HNEpC，OSM作为一种细胞因子能够破坏上皮细胞屏障功能，从而使LPS与其细胞内受体结合启动炎症反应，可以作为诱导条件构建更加有效、稳定的体外鼻腔炎症模型，能够更加真实全面准确地反应鼻腔药物原料及产品的筛选及抗炎效果的评价。

技术领域

本发明涉及鼻腔护理产品安全性和功效性检测技术领域，尤其涉及一种抑瘤素M联合脂多糖诱导人鼻粘膜上皮细胞炎症模型、制法以及应用。

背景技术

慢性鼻炎是鼻黏膜及黏膜下层的慢性炎症。其主要特点是炎症持续三个月以上或反复发作，迁延不愈，间歇期亦不能恢复正常，且无明确的致病微生物，伴有不同程度的鼻塞，分泌物增多，鼻黏膜肿胀或增厚等障碍。根据慢性鼻炎的病理和功能紊乱的程度，可分为慢性单纯性鼻炎和慢性肥厚性鼻炎，前者是以鼻黏膜肿胀、分泌物增多为特征的鼻黏膜慢性炎症，后者是以黏膜、黏膜下层甚至骨质的局限性或弥漫性增生肥厚为特点的鼻腔慢性炎症。鼻炎的反复发作严重影响了患者的生活质量、睡眠质量和工作效率。近年来，随着环境和气候的变化，多中心统计研究表明不同国家的鼻炎发病率均有逐年增加的趋势，寻找治疗或者缓解鼻炎的药物及护理液成为研究热点，以筛选有效药物和评价药物功效为目的的细胞炎症模型急需建立。

鼻黏膜上皮细胞是抵御致病菌、有毒化学物质、过敏原等外来有害物质侵袭的第一道防线，上皮细胞识别病原体启动后续的天然免疫反应。黏膜屏障功能受损可加速炎症性鼻病的进展。当受到外界刺激时，鼻腔黏膜会发生炎症反应，这是一种正常的防御性反应，对维持鼻粘膜的屏障功能至关重要。炎症发生时，细胞分泌大量炎症相关因子，如内毒素(LPS)的主要受体TLR4、调控参与免疫反应的早期和炎症反应各阶段的许多分子的NF-κB、促进炎症反应的TNF-α(肿瘤坏死因子)和致炎因子IL-1β(白介素1β)等。

正常鼻黏膜上皮细胞通过紧密连接、黏附连接、桥粒、及缝隙连接四种连接方式将细胞及细胞旁物质紧密的连接在一起，形成一道致密的组织屏障，有效组织外界变应原及大分子物质直接接触进入人体组织。诸多研究表明，clauduins在维持结构和功能中起关键作用，鼻粘膜上皮细胞中claudins的异常表达可能造成紧密连接的形态变化，从而导致黏膜上皮屏障的破坏。

抑瘤素M(oncostatinM,OSM)属于IL-6细胞因子家族，OSM在上皮屏障功能的破坏中起到重要作用。研究表明，慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者的鼻息肉组织中OSM表达明显增加，进一步对体外培养的正常支气管上皮和鼻腔黏膜上皮组织中给予OSM刺激，出现了与活体组织相似的上皮屏障结构显著丧失，紧密连接结构的严重紊乱。

目前，炎症细胞模型主要是模拟慢性鼻炎的动物模型已建立许多，如OVA诱导的过敏性鼻炎大鼠模型，但是用于体外研究的鼻腔黏膜上皮细胞炎症模型并未建立，体外细胞炎症模型由于操作简单、成本低、周期短，一直是研究人员进行抗炎药物开发和机制研究的首选。建立一种OSM联合脂多糖诱导的人鼻腔黏膜上皮细胞炎症模型是具有重要意义的。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供了一种抑瘤素M(OSM)联合脂多糖(LPS)诱导人鼻粘膜上皮细胞炎症模型、制法以及应用，其是先使用OSM刺激鼻腔黏膜上皮细胞HNEpC，再用LPS处理细胞，从而模拟细胞受到变应原感染后发生的炎症反应。

所述的模型对鼻腔炎症反应还原性高，更能完善真实地评价鼻腔类产品的抗炎效果及对慢性鼻炎有治疗或症状缓解的活性物筛选实验及机制研究，且解决了单一脂多糖诱导炎症模型的不稳定性问题。

本发明具体技术方案如下：