[发明专利]一种磁珠法提取血浆游离DNA的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提出了一种磁珠法提取血浆游离DNA的试剂盒及其使用方法，试剂盒包括：裂解液、蛋白酶K、结合液、磁珠溶液、第一清洗液、第二清洗液和洗脱液，所述裂解液和结合液分别浓缩制成裂解液冻干粉和结合液冻干粉。本发明试剂盒通过其特定的试剂组合，在使用过程中不需要多次重复的离心，在保证血浆游离DNA总量的同时，避免离心过程中可能带来的交叉污染，提高DNA纯度。

技术领域

本发明涉及DNA检测领域，尤其涉及一种磁珠法提取血浆游离DNA的试剂盒及其使用方法。

背景技术

血浆是血液除去血细胞、白细胞和血小板外的液体组分，约占全血体积的50％。研究表明血浆中含有水、血浆蛋白、糖类外，还有游离在细胞外的脱氧核糖核酸分子，即为血浆游离DNA。血浆游离DNA大部分都是双链DNA分子，其片段长度远小于基因组DNA，主要集中在0.1～0.3kb之间。在癌症发展、诊断和治疗的整个自然过程中，血浆游离DNA分析有潜在的应用价值。近年来，血浆游离DNA在医学诊断中的应用不断拓展，其广泛应用于无创产前、肿瘤液体活检和肿瘤个体化用药指导等领域。

由于血浆游离DNA片段小，含量低，其提取的难度远高于基因组DNA。目前市场上的游离DNA提取试剂盒存在提取过程中血浆游离DNA的损失，蛋白残留等问题，从而影响血浆游离DNA纯度。因此需要研究一种可以降低游离DNA损失和蛋白残留，从而提高血浆游离DNA检测结果准确性的试剂盒。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了可以降低游离DNA损失和蛋白残留，提高血浆游离DNA检测结果准确性的一种磁珠法提取血浆游离DNA的试剂盒及其使用方法。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种磁珠法提取血浆游离DNA的试剂盒及其使用方法。

一种磁珠法提取血浆游离DNA的试剂盒，包括：裂解液、蛋白酶K、结合液、磁珠溶液、第一清洗液、第二清洗液和洗脱液，上述溶液的溶剂均为去离子水。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述裂解液浓缩制成裂解液冻干粉。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述裂解液冻干粉由pH值为8.0、浓度为0.45-1mol/L的EDTA溶液、浓度为0.5-3mol/L的柠檬酸钠溶液、浓度为0.1-1.3mol/L的海藻酸钠溶液，浓度为0.25-0.8mol/L的十六烷基三甲基溴化胺溶液和体积分数为0.1％-2％的吐温20制备而成。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述结合液浓缩制成结合液冻干粉。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述结合液冻干粉由浓度为4-8mol/L的异硫氰酸胍溶液、浓度为0.1-2mol/L的乙酸钠溶液和体积分数为0.1％-1％的曲拉通x-100溶液制备而成。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述结合液和裂解液冻干粉的制作方法为：在配置好的裂解液和结合液中分别加入0.3％-0.5％的稳定剂，转入1.5ml离心管内，然后置于真空冷冻浓缩仪内，液体经低温冻结、脱水至干粉状，浓缩条件是：冷凝器温度-40～-30℃，加热器转速为10000-13000r，温度为45-56℃，浓缩时间为60-90min。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述真空冷冻浓缩仪包括冷凝器、加热干燥器和真空泵。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述结合液和裂解液经完全冻结，并在真空条件下使冰晶升华，制备得到冻干粉。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述稳定剂为黄原胶和三聚磷酸钠，黄原胶和三聚磷酸钠的质量比为(1-3):(2-5)。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述磁珠溶液的浓度为30-55mg/mL，磁珠的表面包覆二氧化硅纳米层，内核为四氧化三铁。