[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒IgA抗体的ELISA检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明提供一种针对非洲猪瘟的抗体检测方法，该检测方法以非洲猪瘟病毒采集猪的口腔拭子、鼻腔拭子、肛门拭子、阴道拭子或乳汁为检测样品，通过ELISA抗体检测方法获得检测样品中IgA的含量，从而对检测猪的感染及免疫情况作出判断，或进一步结合检测猪的抗原检测结果对感染情况作出判断。本发明的方法采样简单、敏感性好、特异性强、且能彻底消除由于采血引起交叉感染的风险。

技术领域

本发明涉及抗体检测领域，尤其涉及非洲猪瘟病毒抗体的检测试剂及方法。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)引起的家猪和野猪的烈性传染病，为世界动物卫生组织(OIE)规定必须申报的一类动物疫病，给疫区国家造成了巨大的经济损失(Costard et al.,2013)。ASFV为一大的有囊膜的双链DNA病毒，属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)、非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)成员(Dixon et al.,2013)。

在2018年8月份，非洲猪瘟在我国开始发生后，给我国生猪产业造成了巨大损失，同时给我国的“肉篮子”及食品安全带来巨大威胁。由于该病毒的本身特性，到目前为止，还没有安全有效的疫苗。防控主要是利用检测技术进行生物安全构建和清除感染猪。

目前非洲猪瘟的检测技术主要有两大类。一类是抗原检测，一类是抗体检测。抗原检测主要是采用荧光PCR的方法，对猪的组织(如：血液、唾液、脏器等)和环境样品(饲料、水、猪舍的表面采集样品)进行检测，排查感染猪和检测环境，防止非洲猪瘟病毒感染猪群。抗体检测主要是用ELISA方法对血清进行检测，对感染非洲猪瘟病毒的无症状猪或者是耐过猪进行检测，排查到感染猪进行淘汰。抗体检测解决了抗原检测中存在假阴性这一技术漏洞，是抗原检测的必要补充。两种检测方法的联合应用，会大幅提高非洲猪瘟的防控效率和效果。

由此可见，非洲猪瘟抗体检测是防控该病的重要技术手段。目前的抗体检测是通过ELISA方法对血清中的IgG进行检测，该方法需采集猪的血液后分离血清进行检测。虽然检测血液中的IgG是常用的抗体检测方法，但是该检测方法首先需要保定猪、然后采血、分离血清后才能进行检测。方法不但费时费力，主要是需要对体积和重量较大的猪尤其是体重在100kg左右的猪来讲，保定是难度很大的。同时，采血的操作容易造成猪皮肤出现创口，患猪血液中非洲猪瘟病毒含量很高，有造成交叉感染的风险。基于以上原因，针对非洲猪瘟的检测，市场需要采样简单、检验准确并能消除交叉感染风险的检测方法。

发明内容

免疫球蛋白A(简称为IgA)分两种类型：即血清型IgA和分泌型IgA。血清型IgA存在于血清中，血清IgA具有某些IgG和IgM的免疫功能，特异性IgA能中和血液中的抗原。分泌型IgA存在于黏膜的分泌液中，例如：唾液、鼻腔液体、泪液、肛门粘膜处的液体、阴道液体以及乳汁当中，均含有IgA抗体。分泌型IgA是机体局部黏膜抗感染免疫的主要抗体。故又称黏膜免疫抗体。它能抑制微生物在呼吸道上皮附着，减缓病毒繁殖，有重要的免疫屏障作用，对某些病毒、细菌和—般抗原具有抗体活性，是防止病原体入侵机体的第一道防线。

机体内IgA的含量低于IgG，因此，针对病毒的抗体检测方法多以血清中的IgG为检测对象。我们的研究以IgA为检测对象，通过特定的检测手段，建立了非洲猪瘟病毒IgA的ELISA抗体检测方法，该方法避免了血液采样，通过非洲猪瘟病毒采集猪的口腔拭子、鼻腔拭子、肛门拭子、阴道拭子或乳汁为样品，采用特定的检测试剂及检测方法，高效、灵敏的检测到了非洲猪瘟病毒IgA的含量。对非洲猪瘟的抗体检测提供了新的手段。

据此，我们提出本发明。