[发明专利]基于快速荧光诱导动力学的山核桃耐高温性评价方法

说明书

本发明公开了基于快速荧光诱导动力学的山核桃耐高温性评价方法，包括先收集样品并培养，然后对样品进行热处理，采用多功能植物效率分析仪对样品进行测定，获得快速荧光诱导动力学曲线(OJIP曲线)和参数，最后根据部温度下各组样品OJIP曲线变化和参数的差异进行比对分析，得到山核桃耐热性的评价结果。本发明中提出一种利用快速叶绿素荧光上升动力学技术，无损伤地评价不同砧木嫁接山核桃耐热性的方法，可通过不同品种山核桃的快速叶绿素荧光在不同温度的变化，分析出山核桃的耐热性，是一种科学有效、无损、准确的方法。

技术领域

本发明涉及山核桃耐高温性评价技术领域，特别涉及一种基于快速荧光诱导动力学的山核桃耐高温性评价方法。

背景技术

山核桃是一种落叶乔木，为胡桃科山核桃属植物，又名小核桃、野漆树。主要产于浙、皖交界的天目山区、昌北区及横路乡一带，是我国重要的经济作物之一。

温度是影响植物生长的主要环境因子。山核桃幼苗要求生长在阴凉环境下。在夏季高温季节或者干旱少雨的月份，常导致山核桃叶片出现不同程度的萎蔫或坏死，表现出较差的抗热性。高温会影响植物的生长代谢，使植物体受到伤害，严重时甚至导致植物死亡。因此耐热性研究是经济植物生理抗性研究的热点和重点。

快速叶绿素荧光动力学OJIP上升曲线和JIP-test分析，以其无损、准确、快速的特点，被广泛而成功地应用于植物逆境生理状态的研究。目前人们对于山核桃耐热性研究方法较多较杂，且都是破坏性的，需要取样分析，导致这些方法操作繁杂，不够直观，尤其缺乏利用快速叶绿素荧光动力学，系统地无损伤地对山核桃耐热性进行试验和评价，筛选不同山核桃苗的耐热性。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明建立了利用快速叶绿素荧光上升动力学技术，评价不同砧木嫁接山核桃耐热性的方法，可以解决现在对于山核桃耐热性研究方法较多较杂，且都是破坏性的，操作繁杂，不够直观，尤其缺乏利用快速叶绿素荧光动力学，系统地无损伤地对山核桃耐热性进行试验和评价的难题。

(二)技术方案

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案，基于快速荧光诱导动力学的山核桃耐高温性评价方法，包括以下具体步骤：

S1：样品收集和培养：选用不同品种山核桃幼苗栽于培养钵，作为样品放置苗圃中进行缓苗养护；

S2：样品热处理：将幼苗设立对照组和实验组，分别放于热处理环境，热处理环境因素均设置相同，并且设定不同的胁迫温度；

S3：获得OJIP曲线和参数：测定样品叶片的OJIP曲线与相关的叶绿素荧光参数；

S4：分析与评价：对获得的OJIP曲线进行JIP-test分析，对数据进行处理与绘图，进行单因素方差分析(one-wayANOVA)和Duncan多重比较分析(α＝0.05)，将分析结果统计整理后得到评价结果。

作为本发明的一种优选技术方案，所述S3中，测定样品叶片的OJIP曲线的具体步骤为：

S301：测定前将样品均暗适应20min，向暗适应后的叶片连续照射1s饱和脉冲红光(650nm，3500μmol·m^-2·s^-1)；

S302：选取植株从上往下第4-5片成熟叶片作为测定叶片，采用多功能植物效率分析仪测定样品叶片快速叶绿素荧光诱导动力学曲线，即OJIP曲线，并获得以下叶绿素荧光参数，包括初始荧光Fo(50μs)、反应中心(RCs)、K点(300μs)的荧光水平Fk、J点(2ms)的荧光水平F_J、I点(30ms)的荧光水平FI和P点(0.3-2s)处的最大荧光强度F_M。